, при запиті слідчих органів та/або судово-медичних експертів.
Відповідь за результатами посіву при виділенні чистої культури та її ідентифікації видається через 5 днів після взяття проби.
A.Проведеніе бактеріологічного аналізу
подученний біологічний матеріал необхідно відразу ж помістити одночасно на селективну і неселективним ПС, оскільки деякі штами гонококів чутливі до концентрацій ванкоміцину і триметоприму, що входять до склад селективної середовища.
Культивування гонококів слід проводити на чашках Петрі діаметром 90 мм з кількістю середовища не менше 20 мл на чашку або 100 мм з кількістю середовища 26 мл. Після приготування чашок з середовищем вони ставляться в термостат при 36 В± 1 В° С на 1 годину для видалення конденсату (зайвої вологості). Пересушування середовища неприпустимо, тому що це відіб'ється на якості зростання гонококів. Перед проведенням посіву чашки необхідно прогріти в термостаті при температурі +36 В± 1 В° С протягом 30 хвилин.
Клінічний матеріал від кожного пацієнта повинен засівають на окрему чашку Петрі. При використанні великих чашок (90 або 100 мм) матеріал з уретри і цервікального каналу у жінок може засівають на одну чашку Петрі в різні її сектори з відповідним маркуванням. Матеріал з уретри чоловіків повинен засівають на окрему чашку.
Взятий матеріал тампоном наноситься на поверхню. Потім стерильною бактеріологічної петлею матеріал розподіляється по площі поверхні живильного середовища штриховими рухами в 3 - 4 різних на правліннях з метою створення умов для зростання окремо розташованих колоній гонококів. Чашки негайно поміщаються в анаеростатах з вмістом СО 2 5 В± 2%. вологістю 70%, який ставиться у термостат з контрольованою температурою 36 В± 1 0 С. Допускається використання ексикатора, який ставиться в термостат з контрольованою температурою 36 В± 1 0 С, в ексикаторі створюються умови підвищеного вмісту СО 2 за допомогою світінні газогенеруючих пакетів і вологості. Чашки проглядаються через 18 - 24 години інкубації, у разі відсутності росту - через 48 годин:
В· При відсутності ознак росту через 72 години інкубації спостереження припиняють.
В· При виявленні характерних колоній проводиться первинна і видова ідентифікація.
B. Ідентифікація нейсерії
Первинна ідентифікація нейсерії проводиться шляхом:
В· візуальної оцінки виду колоній,
В· забарвлення матеріалу підозрілих колоній за Грамом;
В· оксидазного тесту.
В· Оцінений виду колоній
Типові колонії гонококів через 18 - 24 години інкубації опуклі прозорі сіро-білого кольору, мають діаметр 0,5 - 1,0 мм. При подальшій інкубації колонії можуть збільшуватися в розмірах до 3,0 мм і уплощаться. Нерідко на одній чашці можна зустріти колонії різного виду.
Великі труднощі виникають при ідеітіфікаціі колоній гонокока в посівах з ротоглотки, тому що при цьому часто виростають менінгококи і непатогенні нейсерії, колонії яких подібні з колоніями гонококів. Колонії менінгококу виглядають голубуватими, колонії непатогенних нейсерії - білуватими, а гонококів - безбарвними, слизовими. Розмір, колір, морфологія і консистенція колоній можуть варіювати залежно від вживаної живильного середовища. Ідентифікувати збудника можна тільки при визначенні цукролітичних властивостей культур або іншими тестами, підтверджуючими видову приналежність мікроорганізму.
В· Застосування оксидазного тесту
Виявлення оксідазоположітельних грамнегативних диплококів вважається достатнім для їх ідентифікації як N. gonorrhoeae при рутинній діагностиці. Для визначення цитохром-с оксидази можна використовувати один з рекомендованих методів:
В· На підозрілу колонію наноситься крапля оксидазного реагенту {тетраметілфенілендіаміна, 1%-ний водний розчин). Швидка зміна кольору реагенту, протягом 5 - 10 секунд, на синьо-фіолетовий і його збереження довше 30 секунд дозволяє вважати тест позитивним. Реагент, використовуваний в оксидазного тесті, вбиває гонококи, тому подальша робота з цими колоніями буде неможлива.
В· Смужка фільтрувальної паперу змочується декількома краплями реагенту, потім на неї поміщається бактеріологічною петлею матеріал з підозрілої колонії. Цей спосіб дозволяє зберегти матеріал на чашці для проведення подальших досліджень. Висока чутливість оксидазного тесту не узгоджується з його спеціфічностио. Оксідазоположітельнимі можуть бути й інші бактерії, які виділяють цитохромними оксидазу, тому оксідазоположнтельние колонії мікроорганізмів обов'язково потрібно досліджувати мікроскопічно із забарвленням за Грамом.
В· Є комерційні диски і смужки, що містять диметил-р-фенілендіамін гідрохлорид. Платинової петлею або стерильною скляною паличкою випробувану культуру наносять на диск, попередньо злегка змочений дистильованою водою.
Облік результату
Темно-бузкове або синє за...
