барвлення, що з'являється через 10 - 30 секунд, свідчить про позитивною оксидазної реакції. Відсутність зміни кольору - про відсутність даного ферменту.
При дослідженні мазків, пофарбованих за Грамом, з культур враховуються морфологія, розташування і забарвлення гонококів. Після 18 - 24 годин культивування гонококи являють собою скупчення грамнегативних коків і диплококів, мають більш компактне розташування мікроорганізмів в центрі і розріджений і нерівномірний розподіл по периферії.
Поряд з інтенсивно забарвленими в рожево-червоний колір коками зустрічаються і блідо-пофарбовані форми. Більш старі культури (48 годин і більше) важко інтерпретувати, тому що відзначається велика кількість повністю лу клітин. У міру старіння культури збільшується полиморфность гонококів.
Для підтверджуючої ідентифікації нейсерій використовуються тести:
В· вивчення ферментативної активності;
В· імунологічні тести (пряма імунофлюоресценція, коагглютинации);
В· молекулярно-біологічні методи (ПЛР).
C. Вивчення ферментативної активності
Ферментативна активність Neis. gonorrеае вивчається в реакції окислення цукрів. Реакція може бути хибнопозитивної через контамінації досліджуваних культур гонококів іншими бактеріями і помилково негативні при використанні гонококів, культивованих більше 24 годин (внаслідок аутолізу мікроорганізмів). Для попередження цих можливих факторів необхідно виділити чисту культуру гонококів шляхом пересіву типових колоній на чашки Петрі з неселективною середовищем (шоколадний агар). Інкубація проводиться протягом 18 - 24 годин. p> Вивчення ферментативної активності Neis. gonorrhoeae може проводитися в ростозавісімих і ростонезавісімих тестах. При проведенні ростозавісімих тестів цукру та інші субстрати (наприклад, феноловий червоний) вводяться безпосередньо в живильне середовище, на якій здійснюється зростання гонокока. Проте в даний час ці тести не можуть бути рекомендовані, тому що широко використовувані ростонезавісімие тести дають можливість отримати більш швидкий (в протягом декількох годин) і специфічний результат, дозволяючи ідентифікувати виключно Neis. gonorrhoeae і виключити інші непатогенні нейсерій. Існують комерційні набори для вивчення ферментативної активності Neis. gonorrhoeae.
Оцінка проводиться по зміні кольору середовища: при ферментації цукрів - від червоного до жовтому (результат позитивний). Ензімсубстратние тести з використанням ферментів (орто-нітрофеніл-бета-галактозидаза (ONPG), гамма-глютаміл амінопептідазу (GLU-AMP), гідроксіпроліл аміносінтідаза (PIP), гідроксипролін амінопептідазу (НРА), пролін амінопептідазу (Рго-АР)) призначені для швидкої диференціації між N. gonorrhoeae, N. meningitidis, N. tacarnica і деякими штамами N. cinerea і N. Catarrhalis. Результати тесту вважаються позитивними, якщо відбувається зміна кольору середовища - від безбарвного до жовтого для ОФГ і від світло-жовтого до інтенсивно помаранчевому для Глю-АП та Про-АЛ. Однак чутливість і спеціфічіость цих швидких ензімсубстратних тестів виявилися неоптимальними.
Проведення видової ідентифікації можливо також з використанням бактеріологічних аналізаторів і комерційних наборів реагентів.
D. Імунологічні/антигенні підтверджуючі тести
Імунологічні тести рекомендується використовувати тільки в референс-лабораторіях для остаточного підтвердження N. gonorrhoeae .
Імунологічні тести з використанням моноклональних антитіл для прямої імунофлюоресценції (ПІФ), коагглютинации та імуноферментного аналізу є високочутливими і специфічними для точної ідентифікації N. gon orrhoeae . Ці тести можуть проводитися з культурою нейсерій, виділених при первинному посіві. При цьому не потрібно виділення чистої культури гонококів, і ізоляти можуть бути ідентифіковані на18 - 24 години раніше, ніж при вивченні ферментативної активності N. gonorrhoea . Однак ці тести дорожче, ніж ферментативні, комерційні тест системи мають менший термін придатності.
E. Пряма імунофлюоресценція
Тест заснований на використанні флюоресцирующих моноклональних антитіл проти очищеного Р ro У білка зовнішньої мембрани гонокока, який раніше називався 1 або головний білок зовнішньої мембрани гонокока. Дуже важливо строге проходження інструкції виробника кожного окремого тесту.
Молекулярно-біологічні методи
Для виявлення N. gonorrhoeae можуть бути використані ДНК/РНК методи, такі як полімеразно ланцюгова реакція (ПЛР), а також методи, засновані на гібридизації. Однак результати, отримані при використанні цих методів, повинні оцінюватися у зв'язку з клінічною ситуацією, тому що після проведеного лікування гонореї в деяких випадках ДНК може визначатися в зразках до 2 - 3 тижнів після лікування.
Однак з метою отримання живого мікроорганізму і для визначення чутливості до антибіотиків проведе...
