золом (0,3 мл нітробензолу на 1 мл олії). Ю.Н. Зубжицький в якості нефлюоресцірующего масла пропонує використовувати перегнаний анізол.
Спеціальне обладнання
Мікроскоп ультрафіолетовий МУФ-3М або люмінесцентний.
Хід визначення
Кров змішують з акридиновим помаранчевим в пробірці або змішувачі у співвідношенні 1 частина крові і 10 частин фарби (суміш можна зберігати не більше 5 годин). Суміш перемішують протягом 2 хвилин, краплю суміші наносять на предметне скло і накривають покривним склом. При цьому рідина не повинна виходити за межі покривного скла. Мікроскопують за допомогою світлофільтра ЖС-17. У препараті еритроцити мають темно-зелені обриси і не флюоресцируют, а в ретикулоцитах зернистість-сітчаста субстанція світиться яскраво-червоним кольором, завдяки чому ретикулоцити легко підрахувати. Помічено, що в крові, стабілізованої гепарином або цитратом натрію, флюоресценції ретикулоцитів не спостерігається. p> Підраховують 1000 клітин (еритроцитів і ретикулоцитів), подібно підрахунком ретикулоцитів в мазках, після фарбування спеціальними барвниками <# "justify"> III. Автоматичний підрахунок кількості ретикулоцитів за допомогою гематологічного аналізатора.
У сучасних гематологічних аналізаторах технологія підрахунку формених елементів крові заснована на кондуктометричну методі, запропонованому H. Wallace і Joseph R. Culter в 1947 р. Принцип методу полягає в підрахунку числа і визначенні характеру імпульсів, що виникають при проходженні клітини через отвір малого діаметру (апертуру), обабіч якого розташовані два ізольованих один від одного електрода. Кожне проходження клітини через апертуру супроводжується появою електричного імпульсу, який реєструється електронним датчиком. Поділ клітин за категоріями (еритроцити, лейкоцити, тромбоцити, осад) здійснюється приладом на підставі аналізу амплітуди отриманих імпульсов.Чтоби визначити концентрацію клітин, досить пропустити певний обсяг проби через канал і підрахувати кількість імпульсів, які при цьому генеруються. p align="justify"> Слід звернути увагу на те, що крім класичного параметра ретикулоцитів - відносне (%) вміст ретикулоцитів (RET%, percent of reticulocytes), обумовленого за допомогою 1 і 2 методів лабораторної діагностики, у зв'язку з появою високотехнологічних гематологічних аналізаторів (3 метод) стало можливим отримувати (наприклад, за допомогою запатентованого флюоресцентного барвника для аналізатора Sysmex-XT-2000i) додаткові інформативні ретикулоцитарного параметри:
ретикулоцити з низьким вмістом РНК, найбільш зрілі (LFR%, low fluorescence reticulocyte fractions, фракція ретикулоцитів з низькою флуоресценцією),
ретикулоцити з середнім вмістом РНК (MFR%, medium fluorescence reticulocyte fractions) - фракція ретикулоцитів з середньою флуоресценцією);
ретикулоцити з високим вмістом РНК (HFR%, high fluorescence reticulocyte fractions) - фракція ретикулоцитів з високою флуоресценцією);
незріла фракція ретикулоцитів (IRF%, Immature Reticulocyte Fraction).
Диференціація ретикулоцитів, заснована на ступені зрілості і, відповідно, змісті нуклеїнових кислот, є відображенням гемопоетичної активності кісткового мозку.
Методика (аналізатор Sysmex-XT-2000i). У проточній кюветі клітини перетинають промінь напівпровідникового лазера, при цьому відбувається розсіювання променя під великим і малим кутами і збудження флюоресцентного барвника. Це дозволяє визначати різні стадії зрілості ретикулоцитів за змістом РНК у клітинах і інтенсивності їх світіння. Автоматизований підрахунок ретикулоцитів відрізняється високою точністю (підраховується більше 30 000 еритроцитів) і відтворюваністю (коефіцієнт варіації становить близько 6%). Дана технологія забезпечує точний підрахунок ретикулоцитів навіть при їх гранично низьких концентраціях. br/>
Практична робота № 1
лейкоз кров кістковий мозок
Проведіть загальний клінічний аналіз крові
Підготовка робочого місця і лаборанта:
. Лаборанту надіти медичний халат, шапочку, змінне взуття. p align="justify">. Обробити робочу поверхню лабораторного столу, і стілець дезрозчином. p align="justify">. Підготувати, набір для забору крові (перевірка повної компл ектаціі).
. Провести гігієнічну обробку рук (згідно технікою миття). p align="justify">. Провести гігієнічну антисептику рук (згідно технікою). p align="justify">. Одягти медичні рукавички. p align="justify">. Розпочати проведення забору крові. p align="justify"> Проведення забору крові:
. Взяти стерильним пінцетом стерильну ватну кульку. p align="justify">. Змочити ватяний к...
