"justify"> Для дослідження ретикулоцитів користуються і водним розчином метиленової синьки 1:500.
На чисте, знежирене покривне скло наносять краплю розчину метиленової синьки, кладуть його на висушений нефіксованої препарат крові та одразу розглядають іммерсіей мікроскопа.
Метод 2 - фарбування товстої краплі без фіксації, за Романовським-Гімза.
На відміну від зрілих еритроцитів ретикулоцити при фарбуванні НЕ вилуговуються; на тлі протоплазми вони мають базофільно забарвлену синювато-фіолетове сіточку.
Примітки:
. Велике значення для фарбування препаратів крові має якість дистильованої води, вона повинна бути нейтральною. Для перевірки в пробірку з 10 мл випробуваної води опускають кілька крупинок гематоксиліну. При нейтральній реакції вода через 1-5 хвилин забарвлюється в світло-фіолетовий колір. Якщо вода через 5 хвилин не стає фіолетовою, її подщелачивают, додаючи по краплях 1% розчин вуглекислого натрію до появи світло-фіолетового кольору (ознака нейтральної реакції). p align="justify"> Поява фіолетового кольору води раніше хвилини вказує на лужну реакцію; для отримання нейтральної реакції воду підкислюють додатком по краплях 1% розчину оцтової кислоти. За кількістю крапель, необхідних для отримання нейтралізації 10 чи води, визначають кількість лугу або кислоти для нейтралізації даної кількості води. p align="justify"> Дистильовану воду нейтралізують також буферними сумішами з 2 розчинів:
) фосфорнокислий натрій двозаміщений (Na2HP04) - 17,838 г в 1 л води;
) фосфорнокислий калій однозаміщений (КН2РО4) - 13,614 г в 1 л води.
Для приготування цих розчинів необхідно користуватися хімічно чистими сухими реактивами. Розчини зберігаються в темному місці. Для більшого збереження слід додати в кожен розчин по кристалики тимолу. p align="justify"> Для нейтралізації дистильованої води додають на 1 л води по 5 мл кожного розчину.
. Всі фарби для фарбування крові повинні зберігатися в темному місці і не збовтувати. p align="justify">. Мазки змиваються після фарбування за допомогою піпетки або слабким струменем. p align="justify">. Мазки повинні сушитися на повітрі у вертикально-похилому положенні. p align="justify">. У шафі з фарбами для крові не можна зберігати луги, кислоти. p align="justify"> Методи підрахунку кількості ретикулоцитів:
I.Подсчет кількості ретикулоцитів в мазку після фарбування їх спеціальними барвниками. <# "Justify"> Даний метод є на практиці найбільш використовуваним методом у зв'язку з тим, що він простий, досить дешевий і не вимагає спеціального дорогого обладнання, відповідно може застосовуватися в будь клініко-діагностичної лабораторії. p align="justify"> Принцип методу заснований на виявленні зернистість-сітчастої субстанції ретикулоцитів при Суправітальне забарвленні лужними фарбами (насичений розчин діамантового крезілового синього в абсолютному спирті/розчин Азура I/розчин Азура II) з подальшим підрахунком їх у мазку крові. Забарвлення ретикулоцитів проводять або на склі, або в пробірці. p align="justify"> Підрахунок здійснюють за допомогою мікроскопа: приготовані одним із зазначених вище способів мазки мікроскопіруют з імерсійним об'єктивом; в мазку ретикулоцити і еритроцити пофарбовані в жовтувато-зеленуватий колір, зернистість-нитчатая субстанція в ретикулоцитах - в синій (при фарбуванні азуром II і діамантовим крезіловим синім) або синювато-фіолетовий колір (при забарвленні азуром I).
II.Подсчет кількості ретикулоцитів за допомогою люмінесцентної мікроскопії. <# "Justify"> Метод підрахунку кількості ретикулоцитів за допомогою люмінесцентної мікроскопії відрізняється простотою і вимагає трохи часу, більш точний в порівнянні із звичайним методом, так як при люмінесцентної мікроскопії виявляються найдрібніші зерна сітчасто-нитчастих речовини, проте він можливий тільки за наявності люмінесцентного мікроскопа та спеціальних барвників, у зв'язку з чим доступний лише небагатьом лабораторіям.
Принцип підрахунку кількості ретикулоцитів за допомогою люмінесцентної мікроскопії:
Використання здатності субстанції ретикулоцитів флюоресціровать після обробки крові акридиновим помаранчевим.
Реактиви
1. Розчин акридинового помаранчевого на фізіологічному розчині хлориду натрію в концентрації 1:5000. Для приготування ізотонічного розчину рекомендують використовувати дистильовану воду pH 5,8 - 6,8. Розчин акридинового помаранчевого повинен бути свіжим; зберігають його не більше 3 - 5 днів у темному флаконі з притертою пробкою.
2. Нефлюоресцірующее іммерсійне масло. Можна використовувати афлуоль або звичайне іммерсійне масло з флюоресценцією, погашеної нітробен...
