ера використовувалася елективна Безазотисті живильне середовище Берка наступного складу (г / л): До 2 НРО 4 - 0,8; КН 2 РО 4 - 0.2; MgSO 4 - 0,2; CaCl 2 - 0,1; FeSO 4 - 0,005; Fe (SO 4) 3 - 0,005; NaMoO 4 - 0,005; лимоннокислий натрій - 0,5; сахароза - 20,0. До 2 НРО 4, КН 2 РО 4, СаСl 2 розчиняли окремо в невеликій кількості дистильованої води і стерилізували. Ці компоненти додавали до основної середовищі в охолодженому вигляді, щоб уникнути утворення осаду. У середу вносили триптофан (0,4 г / л) в якості попередника синтезу ИУК. У деяких варіантах експерименту в середу додавали екстракт кормових дріжджів (ЕКД) у кількості 500 мг / л, як стимулятор росту.
Приготовану середу (без сахарози) стерилізують автоклавуванням при 1 атм. Протягом 20 хвилин, після додавання сахарози ще 20 хвилин при 0,5 атм.
Для ідентифікації виділених культур використовувалися такі середовища:
виявлення здатності використовувати вуглеводи (рамноза) і сахароспирти (маніт). Склад середовища: основний фон 0,5% пептону, 0,1% К 2 НРО 4, 1% вуглеводу, індикатор бромкрезолпурпур 2 мл 1,6% спиртового розчину на 1 л середовища. Середовище розливають у пробірки по 9 мл і стерилізують автоклавуванням при 1 атм. Потім додають вуглець і стерелізуют 30 хв. при 0,5 атм. Індикатор додають перед посівом.
виявлення здатності до гідролізу крохмалю. Склад середовища: пептон - 1,0 г; крохмаль - 0,2; КН 2 РО 4 - 0,5 г; агар-агар - 1,5 г; вода - до 40 мл, рН середовища 6,8-7,0. Середовище стерилізують автоклавуванням при 1 атм.20 хв., Потім додають вуглевод і стерелізуют 30 хв. при 0,5 атм.
2.2 Відбір грунтових проб
Проби бралися чистим інструментом з верхнього шару грунту. Матеріал дослідження поміщали або в стерильну банку з ватяною пробкою. Для кожної проби писалася докладна етикетка, що позначає дату взяття зразка і місце.
2.3 Підготовка зразка до мікробіологічному аналізу
Добре перемішану грунт засипають на сухе стерильне скло, розкладаючи рівним шаром. Користуючись пінцетом, видаляють корінці та інші сторонні включення. Безпосередньо перед роботою пінцет прожарюють у полум'ї і злегка остуджують на повітрі. З очищеної грунту для зручності проведення подальших відбирають невеликі порції.
2.4 Виділення та ідентифікація виділених культур азотобактера
Накопичувальні культури азотобактера отримують, використовуючи як посівного матеріалу безпосередньо грунт. 50 мг грунту зволожують до пастоподібного стану і за допомогою бактеріологічної петлі розкладають 20-25 грудочок на поверхню середовища в чашку Петрі. Для зручності під дно чашки підкладають трафарет. Закриті чашки поміщають у вологу камеру, яку витримують у термостаті при температурі 28-30? С протягом 2-4 діб. Навколо грудочок повинні з'явитися слизові колонії, які пересівати на скошений агар для подальшого аналізу. Метод грунтових грудочок є найбільш вдалим, тому що він найбільш наближений до природних умов (Aquilanti L., Favilli F., Clementi F., 2004).
2.4.1 Кількісний облік
Приготування розведень
Грунт - матеріал, що має багату мікрофлору....
