Для виділення з нього культури досліджуваного мікроорганізму необхідно приготування послідовних розведень. Для руйнування грунтових агрегатів та десорбції клітин мікроорганізмів з грунтових частинок проб поддвергают спеціальній обробці. Наважку грунту масою 1 грам поміщають в Колю з 100 мл водопровідної води. Колбу з грунтовою суспензією струшують на гойдалки протягом 5 хвилин (150 об / хв).
Після цього суспензія повинна відстоятися (30 секунд), щоб осіли великі частки і негайно ж використовують її для приготування подальших розведень, при цьому враховується, що в отриманій вихідної суспензії досліджуваний матеріал розлучений в 100 раз (друге розведення ).
Стерильний розчин NaCl (0,5%) розливають стерильною піпеткою по 9 мл у стерильні сухі пробірки. Стерильною піпеткою переносять 1 мл грунтової суспензії в пробірку з 9 мл розчину NaCl, отримуючи розведення 10 березень, так як досліджуваний матеріал у ході підготовки до мікробіологічному аналізу вже був розлучений. Суспензію отриманого розведення ретельно перемішують за допомогою нової стерильної піпетки, вбираючи і випускаючи отриману суспензію. Цю процедуру продовжують 3-5 разів, що забезпечує перемішування грунтової суспензії і зменшує адсорбцію клітин на стінках піпетки. Потім цією ж піпеткою беруть 1 мл отриманого розведення і переносять його в другу пробірку-це четверте розведення (10 квітня).
2.4.2 Посів на агаризованих середовища в чашці Петрі
Накопичувальні культури азотобактера отримують на середовищі Ешбі. В якості енергетичного матеріалу використовується сахароза, як найбільш легкодоступна форма органічного субстрату. У стерильні чашки Петрі наливають розплавлену агаризованому середу по 10-20 мл у кожну. Посів роблять з розведень 10 Лютого, 10 3, 10 4. Стерильною мікропіпеткою наносять 0,05 мл грунтової суспензії відповідного розведення на поверхню агарового платівки. Цей обсяг розчину розподіляють по поверхні середовища шпателем. Потім цим же шпателем проводять по поверхні другому чашки. Куди посівний матеріал внесений. Чашки з засіяними середовищами поміщають в термостат при температурі в 26? С на 2 доби.
2.4.3 Виділення чистих культур азотобактера
Ізольовані колонії розсівали методом виснажується штриха, попередньо приготувавши фіксований препарат для підтвердження чистоти виділеної культури та вивчення морфології клітин.
2.4.4 Ідентифікація виділених штамів
Ідентифікацію виділених штамів проводили за комплексом ключових ознак згідно определителю Берги (1997)
Ключові ознаки для диференціювання бактерій роду Azotobacter (Bergey, 1997)
прізнакіAz. chroococcumAz. vinelandiiAz. beijerinkiiпигментчерныйзеленыйсв. корічневийІспользованіе вуглеводів: Крохмалю МаннитаПодвижностьЖгутикиОбразование ЦістОбразованіе капсульної слизу
2.5 Методи дослідження закономірностей росту і циклу розвитку клітин Az. chroococcum
При дослідженні закономірностей росту культури Az. chroococcum використовувалася тверда живильне середовище Ешбі. Чашки засівалися суспензією даних мікроорганізмів (ОП=0,27-0,30) у кількості 0,1 мл і термостатовому при 26? С протягом 24 годи...
