ація при 0,5 - 0,7 атм - 45 хв.
. Мінімальне середовище Хопвуда
К2НРО4 0,8 г
КОН 0,3 г
МgSО4? 7 Н2О 0,2 г0, 01 г
аспарагін 0,05 г
агар 17 г
вола дістільована до 1 Л7-7, 5
Стерілізація при 0,5 - 0,7 атм - 45 хв.
После стерилізації Додати 10 мл 40% глюкози.
.3 Методи
Опромінення штамів S. sioyaensis ультрафіолетовімі Променя
Спори досліджуваного штаму оброблялі УФ-промені з довжина Хвилі 260-280 нм; джерело УФ-променів - лампа Medicor BLM - 12. Година ОБРОБКИ стаєш 120 с. До и после ОБРОБКИ мутагеном проводили послідовні шестікратні розведення спорової суспензії и вісівалі ее на соєве середовище № 14. Порівнювалі число колоній, Утворення спорами, Які вижили после опромінення, з числом колоній, что вініклі Із неопроміненіх суперечка, и визначавши відсоток виживання.
.4 Визначення антібіотічної актівності штамів S. sioyaensis
Експрес-аналіз антібіотічної актівності Вище зазначеного штамів проводили путем визначення індексу продуктівності (ІП). З газону штамів, что РІС 6 діб, вірізалі агарові блоки и накладалі на газон тест-культури. После цього вокруг колоній S. sioyaensis, что сінтезувалі сіоміцін, утворюваліся зони прігнічення зростанню тест-культури, за діаметром якіх ві зна чали індекс продуктівності (ІП) досліджуваніх клонів. ІП визначавши як відношення діаметру зони прігнічення зростанню тест-культури антібіотіком до діаметра блоку.
Визначення резістентності штамів до антібіотіків
Здійснювалі методом діфузії в агар с помощью дисків з антібіотікамі. Спори штамів засівалі газоном на чашки Петрі з СЕРЕДОВИЩА. После цього на шкірні чашку клали по 4-5 паперових диски з антібіотікамі. виробництва ФІРМИ LACHEMA (Чехія) (канаміцін, ерітроміцін, тетраціклін) i виробничого об'єднання Ферейн (Росія) (хлорамфенікол, олеандоміцін, мономіцін, ріфампіцін, стрептоміцін, гентаміцін, оксацілін, бензілпеніці лін, карбеніцілін, ампіцілін, цефалотин, поліміксін М и лінкоміцін ). На 2 і 5 добу вімірювалі діаметрі зон прігнічення зростанню досліджуваніх штамів вокруг дисків. Резістентність досліжуваніх штамів до рифампіцину визначавши методом тітрування спір на агарізовані середовища Із ЗРОСТАЮЧИЙ концентраціямі антібіотіка. Контролем служили Варіанти досліду, в якіх спори вісівалі на ЦІ ж середовища без антібіотіків.
Віділення мутантів актіноміцетів Зі зміненою стійкістю до антібіотіків
Мутанти, стійкі до антібіотіків, отрімувалі путем висіву суспензій суперечка або міцеліальніх фрагментів на соєве середовище № 14 Із різнімі концентраціямі антібіотіків. Колонії, что виростала на СЕРЕДОВИЩА з антібіотіком, пересівалі на матрічні чашки и робили повторну перевірку їх резістентності, як описано Вище.
Визначення стабільності ознакой резістентності мутантів до антібіотіків проводили путем посіву спор и міцеліальніх фрагментів после їхнього зберігання на одвірках з антібіотікамі та без них, та наступна пересівом реплікамі на середовища з відповідною концентрацією антібіотіка.
Статистичнй Обробка результатів ...
