емпературі (18-30) гр.С. На бортах пластинки проти кожної лунки записують номер досліджуваної сапной крові.
На початку роботи ставлять контроль антигену з позитивний сапной сироваткою і з негативною сироваткою крові коней, а також контроль антигену на спонтанну аглютинацію (до 0,03 куб.см антигену додають 0,03 куб.см сироватки або фізіологічного розчину). Досліджувані сироватки крові в дозі 0,03 куб.см вносять на дно лунки за допомогою шприца-напівавтомата або микропипетки. Після внесення кожної сироватки шприц-напівавтомат (мікропіпетку) тричі промивають фізіологічним розчином і підсушують фільтрувальним папером. У кожну лунку поруч з сироваткою за допомогою шприца-напівавтомата або микропипетки вносять 0,03 куб.см антигену. Потім антиген в кожній лунці ретельно змішують з сироваткою ручним змішувачем до отримання однорідної суміші, розподіляючи її по всій поверхні лунки.
Платівку з сироватками з антигеном похитують протягом 4 хв. обережними обертальними рухами вручну або за допомогою апарату для похитування діагностичних пластинок. Облік результатів реакції проводять візуально через 4 хв. після змішування сироватки крові з антигеном при злегка похилому положенні пластинки. Реакцію вважають позитивною при наявності чітко вираженої аглютинації забарвлених сапних бактерій антигену у вигляді дрібних або великих пластівців при частковому або повному просвітління рідини. Реакцію вважають негативною при відсутності чіткої аглютинації. Аглютинацію, яка виникає пізніше 4 хв., Не враховують. Після врахування реакції пластинки і змішувач дезінфікують зануренням їх на 5 хв. в 1%-ний розчин хлораміну, потім миють водопровідною водою, обполіскують дистильованою водою, висушують на повітрі і використовують повторно. Для проведення дезінфекції та сушки пластинок використовують касети й штативи-сушарки.
Реакція зв'язування комплементу.
Фізіологічний розчин. 2,5%-ва суспензія еритроцитів барана в фізіологічному розчині. Кров у барана беруть вранці, до годівлі, з яремної вени у флакон з скляними або металевими бусами, струшують протягом 7-10 хв. і потім фільтрують через марлю. Еритроцити 3-4 рази відмивають фізіологічним розчином шляхом центрифугування при 2500-3000 об. / Хв. до повного знебарвлення промивної рідини. З осаду еритроцитів готують 2.5%-ную суспензію у фізіологічному розчині.
Потім по 0,2 куб.см кожного розведення переносять в ряд пробірок, в кожну пробірку додають по 0,2 куб.см комплементу в розведенні 1:20, 0,2 куб см 2,5%-ної суспензії еритроцитів і 0,4 куб.см фізіологічного розчину. Штатив з пробірками струшують і поміщають у водяну баню на 10 хв. при температурі (37-38) гр.С. Титром гемолизина вважають найбільша його розведення, при якому спостерігається повний гемоліз еритроцитами.
Приготування гемолітичної системи.
Гемолітичну систему готують змішуванням в рівних обсягах 2,5%-ної суспензії еритроцитів барана в фізіологічному розчині і розчину гемолітичної сироватки, взятої у подвоєному титрі (наприклад, пр титрі гемолизина 1:1000 беруть 2:1000, тобто для приготування 10 куб.см гемолизина беруть 0,2 куб.см гемолизина з ампули і розводять в 99,8 куб см фізіологічного розчину).
Отримані 100 куб.см розчину гемолизина доливають при постійному помішуванні до 100 куб.см суспензії еритроцитів. Гемолітичну систему поміщають у водяну баню при температурі (37-38) гр.С на 20 хв. для сенсибілізації еритроцитів.
Титрування ...
