комплементу проводять перед кожною постановкою реакції. Відбирають необхідне для даного обсягу досліджень кількість ампул (флаконів) з комплементом (з розрахунку 1 ампула або флакон на 100 пробірок реакції), розчиняють препарат у фізіологічному розчині, кількість якого вказано на ампулі (флаконі), зливають в одну ємність і перемішують. Таким чином отримують основний розчин комплементу, який зберігають у холодильнику протягом постановки реакції. З цього розчину готують розведення 1:20 для титрування.
Комплемент титрують в бактеріолітичну системі, для чого позитивну, негативну і 1-2 сироватки з досвіду розводять фізіологічним розчином 1:10, інактивують при температурі (60 +62) гр.С протягом 30 хв. і розливають по 0,2 куб.см кожну в два ряди пробірок.
Внесення інших інгредієнтів і умови титрування показані в табл.1 на прикладі негативної сироватки, при цьому в другі ряди сироваток замість антигену вносять 0,2 куб.см фізіологічного розчину.
При роботі з апаратом Флоринського для розведення комплементу беруть додатковий ряд пробірок, в яких роблять ті ж розведення комплементу, але обсяг збільшують в 10 разів, Потім разлівателем Флоринського переносять по 0,2 куб.см розведеного комплементу в усі пробірки кожного ряду і вносять інші інгредієнти .
Титром комплементу в бактеріолітичну системі вважають мінімальна кількість його, необхідний для повного гемолізу еритроцитів барана в пробірках з негативною сироваткою і сироватками з досвіду з антигеном і без антигену, а також в пробірках з сапной сироваткою без антигену при повній затримці гемолізу в пробірках з сапной сироваткою і антигеном.
Кожну сироватку крові попередньо проінактівірованную, як зазначено в п.3.2.4., Досліджують у трьох пробірках: без антигену в розведенні 1:5 (контроль сироватки) і з антигеном в розведенні 1:5 і 1:10.
Для цього в першу і третю пробірки розливають фізіологічний розчин в кількості 0,4 куб.см і 0,1 куб.см відповідно. Потім в першу вносять 01 куб.см досліджуваної сироватки, змішують і переносять 0,2 куб.см в другу і 0,1 куб.см - в третьому пробірки.
У досвідчені пробірки вносять по 0,2 куб.см Сапна антигену в робочому розведенні в контрольні - по 0,2 куб.см комплементу в установленому титрі. Штативи струшують і поміщають у водяну баню на 20 хв. при температурі (37-38) гр.С.
Потім в усі пробірки вносять по 0,4 куб.см гемолітичної системи, струшують і знову розміщують у водяну баню на 20 хв. при температурі (37-38) гр.С.
Одночасно ставлять такі контролі:
Позитивна і негативна сироватки в тих же розведеннях, що і випробовувані з антигеном і без антигену;
антиген без сироватки (на антікомплементарние); антиген без сироватки і комплементу (на гомотоксічность); гемсістема з фізіологічним розчином.
При масових дослідженнях допускається постановка реакції в одній пробірці з розведенням сироватки 1:10 (0,02 куб.см сироватки і 0,18 куб.см фізіологічного розчину). При роботі з апаратом Флоринського до 0,02 куб.см сироватки додають 0,2 куб.см фізіологічного розчину. Сироватки з затримкою гемолізу досліджують повторно, як зазначено вище.
Облік результатів реакції проводять двічі: безпосередньо після останнього прогрівання пробірок у водяній лазні і на наступну добу після зберігання пробірками?? До при температурі (4-8) гр.С.
Спочатку враховуються результати контролів. Якщо в пробірках з позитивною сироваткою і ан...
