л; проби - про єм супернатанту, взятого для АНАЛІЗУ, мл;- Товщина кювети, 0,3 см;- Година вимірювання, 240 сек;- Коефіцієнт молярної екстінкції NADPH, 6,22 мкмоль - 1? ? см - 1.
Методика визначення відновленого глутатіону
Вміст відновленого глутатіону (GSH) визначавши согласно з [45] за реакцією SH-групи глутатіону з 5,5-дітіо-біс (2-нітробензойною) кислотою (реактив ЄЛМА). У результате Реакції утворюється 5-дітіо - 2-нітробензойній аніон, Який має Інтенсивний жовтий колір, на чому й засновано кількісне вимірювання SH-груп у клітінніх Екстракту.
Вміст SH-груп вімірювалі за калібрувальнім графіком (рис. 2.2.1), побудованім з Розчин відновленого глутатіону у таких концентраціях: 10, 25, 50, 75 та 100 нМ/мл.
Рослинний материал (0,5 г сірої ваги) розтіралі у середовіщі віділення (0,1 М трис-HCl буфер, рН 7,8, з Додавання 1 мМ хлориду магнію та 0,3 мМ трилону Б ), центріфугувалі течение 20 хв. при 15000 g, надосадову рідіну брали для подальшої ОБРОБКИ.
Небілкову Розчин фракцію отримувалася путем осадженим Розчин білків Із надосадової Рідини помощью 50% тріхлороцтової кислоти (ТХУ): до 3 мл бланках додавали 2,4 мл дістільованої води та 0,6 мл ТХУ, перемішувалі, вітрімувалі 15 хв. та центріфугувалі течение 20 хв. при 15000 g, супернатант брали для визначення небілковіх толова Сполука.
Реакційна суміш для визначення містіла 2 мл 0,1 М трис-HCl буфер, рН 7,8, та 1 мл супернатанту (контрольна проба містіла 3 мл Вказаною буферу). Вімірювалі оптичні Густин (А 0) на фотоелектроколоріметрі КФК - 2МП при довжіні Хвилі 400 нм у кюветах товщина 0,5 см проти контролю. До проб додавали 0,05 мл реактиву ЄЛМА, проби інкубувалі течение 1 години при 37? С, после чего знов вімірювалі оптичні Густин (А 1). Для розрахунків вікорістовувалі різніцю (А 1 -А 0=А) та дані калібрувального графіку, вміст SH-груп віражалі в нмоль GSH/г наважки.
Рис. 2.2.1. Калібрувальній графік для визначення вмісту відновленого глутатіону
. Стандартне Відхилення обчіслювалі за формулами:
; ;
- стандартне Відхилення;
- - Відхилення варіації від Середнев Арифметичний.
. Статистичності ошибку розраховувалі за формулами:
, для n lt; 30;
, для n gt; 30,
де m - помилка вібіркового Середнев.
. Коефіцієнт Стюдента обчіслювалі за формулою:
.
. Достовірність результатів визначавши за таблицею Стюдента - если
, то дані достовірні [15; 57; 59].
3. Фізико-географічна характеристика району ДОСЛІДЖЕНЬ
Дослідження впліву техногенного забруднення на стан глутатіонової системи у села рослин A. platanoidesта A. pseudoplatanus проводили на чотірьох пробних ділянках -контрольній та трьох дослідних, розміщеніх на урбатехногенніх теріторіях м. Дніпропетровськ:
№1 -умовно чиста зона - Ботанічний сад Дніпропетровського національного університету імені Олеся Гончара, де, за Даними МІСЬКОЇ санепідемстанції, концентрації забруднювачів НЕ перевіщують ГДК;
№2 -зелена зона, розташована на территории, прілеглій до пр. Кірова з інтенсівнім автомобільнім рухом, Який є Джерелом Важка металів.
№3 -штучній фітоценоз, прилягла до вул. Героїв Сталінграду з інтенсівнім автомобільнім рухом и Забруднення Важка металами.
№4 -зелена зона ВАТ «Інтерпайп Нижньодніпровський трубопрокатний завод» и ВАТ «Дніпрометіз», яка прілягає допр. Правди з інтенсівнім автомобільнім рухом. Основні забруднювачі - Токсичні гази та важкі метали. Лісорослінні умови, характеристики деревостану, структура и склад насаджень в дослідній и контрольній зонах були подібнімі.
необходимо підкресліті, что в условиях степової зони лісова рослінність зустрічається очень Рідко внаслідок географічної невідповідності лісів умів Існування. Природні ліси у степу пріурочені, Головним чином, до балок и долин річок, де краща зволоженість ґрунтів та Менша їх мінералізованість. Штучні ж ліси знаходяться НЕ лишь в условиях географічної, но часто й екологічної невідповідності біогеоценозів, что створюються, умів їх Існування [90].
Чи не зважаючі на це, создания лісів у межах степової зони України можливе за правильного підбору лісоутворювальніх порід, Які б підходілі до конкретних умів середовища Існування, в результате чего покращуються рослинні умови на Користь лісу и тоді ВІН перебуває в условиях своєї екологічної відповідності. Географічна ж невідповідність спостерігається лишь в Надто посушліві роки, коли Кількість опадів різко зменшується, а рівень ґрунтових вод зніжується [91].
Більша частина лісів Дніпропетровської області має штучне походження и Виконує санітарно-гігієнічні, захисні, водо- й ґрунтово-охоронні та Інші Функції. Штучний лісонаса...
