Імуногістохімічна демонстрація нюхових властивостей глутатіону S-трансферази класу pi (N24) в нюхової системі озерної нерки у процесі онтогенезу і клітинної проліферації
Анотація
У ссавців, глутатіон S-трансферази (GST) міститься в нюховому епітелії і включений в роботу нюхових рецепторів для метаболізму ксентобіотіков. Раніше, ми розглянули протеїнову і генну експресію лососевої нюхової ГСТ класу pi (soGST) в нюхових клітинах-рецепторах (ОРК) риб сімейства лососевих. Однак, хронологічна послідовність soGST в ОРК у процесі онтогенезу і клітинної проліферації все ще невідома у цього сімейства. У цьому дослідженні, ми досліджували soGST з погляду імуногістохімії, використовуючи специфічність антитіл до soGST в нюхової системі (нюхові плакоди, нюхові ямки, нюховий епітелій, нюхові нерви і нюхова цибулина) ембріонів озерної нерки (Oncorhynchus nerka) і 5-бром - 2`-деоксіурідін (BrdU) експериментальної риби. Проекція нюхових нервових пучків з нюхової ямки на внеменную нюхову цибулину була пізнана у ембріона на 28 дні після запліднення. Нюхові вії були вперше виявлені на апікальній поверхні ОРК на 43. soGST-иммунореактивность була вперше виявлена ??всередині клітин нюхових ямок на 55 день. На 58 день, число soGST-імунореактивних клітин значно збільшилася в нюховому епітелії; і soGST-Иммунореактивность фібри були помічені в нюхових нервах і нюхових цибулинах. Ін віво засвоєння БДУ у риби, віком 1 рік, ми спостерігали вперше на 7 день після маркування, яку нюховий епітелій проявив в ОРК в яких обидва soGST-иммунореактивность і БДУ співіснують. Ці результати показують, то soGST-иммунореактивность синтезується в зрілих ОРК озерної нерки після клітинного формування та диференціювання.
Ключові слова: риба, нюховий епітелій, нюховий нерв, нюхова цибулина, імуногістохімія.
Вступ
Глутатіон -S- трансфераза (GST; EC 2.5.1.18) є суперсімейства ксентобіотіко-детоксицирующих ферментів, що зв'язують різні ліганди і каталізують нуклеофільниє добавки у глутатіону, для несхожих електрофільних субстратів в ряді тканин (Jakoby 1978; Salinas and Wong 1999). Засновані на цій біохімічної характеFigтіке, цитозольні GST звичайно розділяються на чотири класи: альфа, мю, пі і тета (Mannervik and Danielson 1988; Meyer et al.1991). Попередні дослідження показали високу експресію GST протеїнів і/або м-РНК в нюховому епітелії щурів (Banger et al. 1993; Ben-Arie et al. 1993). Иммунореактивность GST були локалізовані в підтримуючих епітеліоцитах і залозах Боумена нюхового епітелію у дорослих щурів (Banger et al. 1994) і щурів в процесі дорослішання (Krishna et al. 1994). Наша попередня наукова робота розповідала про те, то у щурів зі спровокованої (дефіцитом цинку) аносмія (втратою нюху) спостерігалося зниження експресії GST в нюховому епітелії (Kudo et al. 2000). Ці роботи показали, що GST має вирішальне значення в метаболізірованія різних субстанцій, представлених обонятельному епітелію в якості одорантів і токсичних субстанцій. Було запропоновано, що GST можуть допомагати нюховим рецепторам ксенобіотіческого метаболізму, як складова частина «перірецепторного явища».
У райдужної форелі (Oncorhynchus mykiss), нюхові рецептори вивчалися на предмет вмісту глутатіону шляхом гистохимического аналізу (Starcevic et al. 1993). GST класу пі був виявлений в ОРК шляхом імуногістохімії зі специфічними до, GST класу пі ссавців (Starcevic and Zielinski 1995), антитілами. Ми розпізнавали лососеві нюхові системно-специфічні протеїни від 24 а.е.м. (N24) у риби, сімейства лососевих - озерної нерки, Oncorhynchus nerka (Shimizu et al. 1993) .N24 формував гомодимер на ~ 43,3 а.е.м. непошкодженою молекулярної маси і демонструє глутатіоідную зв'язує активність (Kudo et al. 1999). Крім того, протеїн і нуклеотидное секвенування демонструє помітну гомологичность між N24 і GST класу пі (Kudo et al. 1999). Иммунореактивность сайти N24 изучавшиеся в цитоплазмі і аксонах ОРК озерної нерки (Kudo et al. 1996) мають схожу з GST класу пі локалізацію в нюхової системі райдужної форелі (Starcevic and Zielinski 1995). До того ж, сильно гібридизувати зв'язку N24 м-РНК були виявлені в ОРК (Kudo et al. 1999). Це є переконливим доказом того, що N24 - це ізомер GST класу пі лосося. Однак, цитофізіолог лососевих нюхових GST (soGST) клітин в нюхової системі не була проаналізована ще ні в однієї особини лосося в перебігу онтогенезу.
У цій науковій праці, ми вивчаємо хронологічну послідовність soGST в нюхової системі (нюховий плакод, нюхова ямка нюховий епітелій, нюхові нерви і нюхова цибулина) ембріона озерної нерки, використовуючи імуногістохімічні методи з використанням специфічних до soGST (анти-N24 ант...
