що дана тест-система носить лінійну залежність між кількістю іммобілізованих клітин і міелопероксідазной активністю Нф. Загальна кількість пофарбованого продукту пероксидазною реакції, виражене в одиницях оптичної щільності, залежить від концентрації секретируемой з азурофільних гранул MPO. p align="justify"> Така залежність, виражена в одиницях оптичної щільності, відображає хорошу чутливість і відтворюваність результатів і дозволяє використовувати для аналізу кількість клітин, рівне 200-300х103/мл.
Перевагою твердофазної тест-системи є малий час для виконання лабораторного тесту і його невелика трудомісткість, також кількісний спектрофотометрический облік результатів.
До недоліків даної лабораторної системи можна віднести стадію іммобілізації клітин на полістиролі. Це з одного боку, зменшує ефективну концентрацію клітин на стадії активної взаємодії MPO з субстратом, з іншого боку, сприяє появі більшої варіабельності одержуваних значень для однієї експериментальної точки, так як адгезивні властивості поліморфноядерних гранулоцитів у різних донорів можуть варіювати в значних межах.
.2 Визначення активності мієлопероксидази в клітинному лізаті поліморфноядерних гранулоцитів
Для визначення загального змісту і загальної активності MPO, що міститься в гранулах поліморфноядерних гранулоцитів, використовується тест оцінки пероксидазною активності лізованих клітин зі спектрофотометрической оцінкою результатів.
Для цього суспензію виділених з периферичної крові Нф в концентрації 100, 200, 300, 400х103 кл/мл поміщають в пробірки для мікроаналізу, вносять рівний об'єм дистильованої води, потім додають субстратную хромогенного суміш. Перед спектрофотометрією результатів все проби центрифугують для видалення з розчину залишків зруйнованих або нелізірованних клітин. p align="justify"> лібераціей МPO в середу інкубації відбувається в результаті порушення цілісності мембран Нф, супроводжуване руйнуванням клітин.
В
Рисунок 3.2 - Активність мієлопероксидази в клітинному лізаті нейтрофілів периферичної крові
Отримані експериментальні дані (малюнок 3.2) відображають практично лінійний характер залежності. Це збільшує ступінь чутливості даної тест-системи, яка допускає використовувати в якості лабораторного методу оцінки спонтанної активності MPO концентрацію клітин, рівну 200х103/мл, що буває істотно при дефіциті експериментального матеріалу. При цьому слід зазначити незначний розкид експериментальних даних для однієї концентрації клітин, що дозволяє припустити досить хорошу відтворюваність результатів. p align="justify"> Позитивними характеристиками даного методу оцінки міелопероксідазной активності Нф є досить висока чутливість і відтворюваність тесту.
До недоліків слід віднести наявність стадії центрифугування, що збільшує час проведення...
