лабораторного тесту, а також неможливість оцінити індуковану активність MPO поліморфноядерних гранулоцитів і визначити коефіцієнт стимуляції клітин, який може бути використаний як критерій оцінки фізіологічного статусу нейтрофільного ланки імунітету .
.3 Визначення спонтанної активності мієлопероксидази нейтрофілів у розчині (модифікований метод) зі спектрофотометричним урахуванням результатів
Для визначення спонтанної активності MPO, секретируемой з азурофільних гранул в середу інкубації, була використана модифікована нами лабораторна тест-система зі спектрофотометричним урахуванням результатів.
Для цієї мети в полістирольні пробірки для мікроаналізу, що містять свежевиделенних суспензію Нф, в концентрації 100, 200, 300, 400х103 кл/мл додавали по 200 мкл субстратної суміші. Проби інкубували при +37 оС протягом 15 хв, реакцію зупиняли додаванням 10% сірчаної кислоти. br/>В
Малюнок 3.3 - Спонтанна активність міелопроксідази інтактних нейтрофілів в розчині (модифікований метод)
Як видно з представлених результатів (малюнок 3.3), залежність між концентрацією клітин в експериментальних пробах і ферментативної активністю MPO, вивільненої з азурофільних гранул, носить майже лінійний характер і розкид межу окремими значеннями в кожній експериментальній точці незначний. Це дозволяє припустити, що чутливість даної лабораторної тест-системи досить висока і дозволяє використовувати її в якості лабораторного методу визначення пероксидазною активності з нижньою межею концентрації клітин в пробі, рівним 100х103/мл. p align="justify"> Високі показники активності MPO, виражені в одиницях оптичної щільності, прямо корелюють з концентрацією клітин в пробі. Визначення активності MPO таким методом дозволяє оцінити спонтанну секрецію ферменту, що визначає рівень біоцидний Нф, інтактними клітинами, без руйнування цілісності клітин, без використання методів іммобілізації клітин на твердих носіях (збільшуючи тим самим ефективну концентрацію поліморфноядерних гранулоцитів на етапі взаємодії MPO c субстратом). Субстратна хромогенного суміш вноситься в пробірки для мікроаналізу відразу після внесення туди експериментальної проби, значно знижуючи також час постановки тесту. Таким чином, експеримент проводиться в розчині і включає тільки одну стадію центрифугування проб перед спектрофотометрической оцінкою результатів. p align="justify"> Для порівняльної оцінки методів визначення спонтанної активності MPO нейтрофілів були використані непараметричні методи статистичної обробки даних: критерій Краскела-Уолліса, Манна-Уїтні, Колмогорова-Смирнова, Вальда-Вольфовица.
Аналіз отриманих результатів показав, що існують достовірно значимі відмінності між рівнем пероксидазною активності Нф, вираженої в одиницях оптичної щільності, із застосуванням модифікованого методу і в тесті з використанням клітин, іммобілізованих...
