тодів: критерію за Краскела-Уоллісу, Манна-Уїтні, Колмогорова-Смирнова, Вальда-Вольфовица. Відмінності вважали достовірними при рівні статистичної значущості p <0,05. Отримані дані представлені у вигляді медіани і 25-75 квартилей. br/>
2.5 Оцінка модифікованої лабораторної тест-системи за допомогою її порівняння з загальноприйнятим методом визначення ферментативної активності поліморфноядерних гранулоцитів на основі В«Референтна тестуВ», в якості якого був прийнятий метод визначення активності мієлопероксидази за допомогою твердофазного методу
В«Референтний методВ» - класичний експеримент або вид клінічних досліджень, що дозволяє звести до мінімуму сістематічекіе помилки.
3. Результати та обговорення
.1 Визначення активності мієлопероксидази поліморфноядерних гранулоцитів у тесті з використанням клітин, іммобілізованих на гідрофобною поверхні
Для визначення спонтанної секреції MPO азурофільних гранул поліморфноядерних гранулоцитів була використана тест-система, досить широко використовувана в лабораторній практиці, що включає Нф, попередньо іммобілізовані на поверхні полістирольного планшета з концентрацією клітин в експериментальної пробі, рівної 100, 200 , 300, 400х103 кл/мл, з подальшим внесенням субстратної суміші, що складається з перекису водню і ортофенілендіамін в робочому буфері. Результати оцінювалися спектрофотометрично при довжині хвилі 492 нм. p align="justify"> Вивільнення депонованого ферменту в середу інкубації відбувається завдяки феномену В«злиття мембранВ» азурофільних гранул і плазматичної мембрани Нф. Основний ендогенний фактор злиття - іони Са2 +, що різко знижують гідратаціонной бар'єр при інтеграції мембран. Іони Са2 + нейтралізують негативний поверхневий заряд, безпосередньо модифікуючи структуру ліпідного бішару і дестабілізують її, створюючи кальцієві містки між двома контактуючими мембранами, і тим самим индуцируя з'єднання мембран. Освіта пофарбованого продукту пероксидазною реакції, виражене в одиницях оптичної щільності, відбувається в результаті здатності MPO окисляти ортофенілендіамін в присутності перекису водню. p align="justify"> Як видно з представлених результатів (малюнок 3.1) в тестах даної
В
Малюнок 3.1 - Активність мієлопероксидази нейтрофілів периферичної крові в твердофазній спонтанному тесті
Конструкції при використанні обраних концентрацій клітин спостерігається зміна спонтанної ферментативної активності мієлопероксидази іммобілізованих клітин для проб, що містять 100, 200, 300 і 400 тисяч кл/мл лінійного характеру. Кількість одиниць оптичної щільності, на які відбувається збільшення активності ферменту в кожній експериментальній точці, відображає середнє значення ферментативної активності Нф для всіх донорів в досліджуваній вибірці. p align="justify"> Таким чином, можна припустити,...
