Теми рефератів
> Реферати > Курсові роботи > Звіти з практики > Курсові проекти > Питання та відповіді > Ессе > Доклади > Учбові матеріали > Контрольні роботи > Методички > Лекції > Твори > Підручники > Статті Контакти
Реферати, твори, дипломи, практика » Курсовые обзорные » Оптимізація методу придушення експресії гена EGFP З використанням кон'югатів антисмислового олігонуклеотиду і пірену

Реферат Оптимізація методу придушення експресії гена EGFP З використанням кон'югатів антисмислового олігонуклеотиду і пірену





>-кінцевого фосфату і фосфодіефірних зв'язків олігодезоксірібонуклеотіди. Розчин цітавлона додавали порціями, причому після додавання кожної повинен випадати білий осад, що свідчить про протікання реакції.

Додавали спочатку 1/3 розрахованого об'єму розчину цітавлона до розчину олігодезоксінуклеотіда, реакційну суміш перемішували і центрифугували при кімнатній температурі протягом 5 хвилин з круговою частотою, рівній 12500 об/хв.

Після цього в реакційну суміш вносили 1/4 розрахованого об'єму розчину цітавлона, повторювали перемішування і центрифугування.

Аналогічні дії виконували і при додаванні 1/6 розрахованого об'єму розчину цітавлона.

Після останнього центрифугування супернатант відкидали, а до осаду добавлялоі 100 мкл метанолу.

Метанол випарювали на вакуумному випарнику, отриману сіль олігонуклеотиду висушували над P 2 O 5 в вакуумованому ексикаторі.


2.7 Отримання біспіренілного похідного олігонуклеотиду


Кон'югати отримували згідно модифікованою методикою [30]

Активація. Реакційна суміш містила 1 - 4 о.е. (5 - 20 нмоль) цітавлоновой солі олігодезоксірібонуклеотда і по 10 мг висушених DMAP, PPh 3 і (PyS) 2 . Активацію 5 -кінцевого фосфату проводили таким чином: спочатку 4 рази повторювали термостатування при 50 Вє С протягом 1 - 1,5 хв і подальше інтенсивне перемішування протягом 5 - 10 с, потім інкубували при 37 Вє С протягом 15 хв.

Кон'югація. До розчину олігонуклеотиду з активованим 5 -кінцевим фосфатом додавали піренілметіламін (2 мг), висушений в ексикаторі над P 2 O 5 під вакуумом. Реакційна суміш безперервно перемішували протягом 2 годин при 56 Вє С.

Виділення продукту. Продукти облягали з розчину 1,2 мл діетилового ефіру, розчиняли в 50 мкл 3 М водного розчину перхлорату літію, переосаждалі 1,2 мл суміші діетилового ефіру і 2% розчину перхлорату літію в ацетоні (1:1) і розчиняли в 50 мкл води. Суміш продуктів реакції розділяли за допомогою звернено-фазової хроматографії в градієнті ацетонітрилу (див. 2.4). Фракції аналізували методом затримки в гелі за допомогою електрофорезу в ПААГ в денатуруючих умовах. br/...


Назад | сторінка 14 з 25 | Наступна сторінка





Схожі реферати:

  • Реферат на тему: Придушення експресії гена EGFP в клітинах з використанням кон'югатів ол ...
  • Реферат на тему: Витяг сульфатного варильного розчину з відпрацьованого варильного розчину
  • Реферат на тему: Проектування трёхкорпусной випарної установки для концентрування водного ро ...
  • Реферат на тему: Автоматизація установки для отримання миючого розчину
  • Реферат на тему: Розрахунок основних параметрів випарної установки для концентрування водног ...