Список використовуваних скорочень
- алкіл-base, азотна основа-2 - (N, N-диметиламіно)-піридин-диметилсульфоксид-суміш дезоксинуклеозидтрифосфатов-дітіотреїтолу-етил
LNA - locked nucleic acid-метілODN - метілфосфонатний олигонуклеотид-олігодезоксінуклеотід-peptide nucleic acidODN - фосфоротіоатний олигонуклеотид
АА - акриламід
мРНК - матрична РНК
о.е. - Оптична одиниця
ВІД - зворотна транскрипція
ПААГ - поліакриламідний гель
пре-мРНК - незріла матрична РНК (НЕ подврегшаяся процесингу)
ПЛР - полімеразна ланцюгова реакція
РС - реакційна суміш
ЕДТА - етилендіамінтетраоцтової кислоти
Введення
Розробка лікарських препаратів спрямованої дії є пріоритетним завданням сучасних молекулярної біології, біоорганічної хімії та медицини. В даний час існує велика кількість робіт, що відображають різні підходи для вирішення цього завдання. По ряду причин найбільш перспективним є підхід, заснований на виборі в якості мішені мРНК патогенного білка і використання властивості комплементарності при взаємодії нуклеїнових кислот один з одним. На сьогоднішній день роботи ведуться в трьох напрямках:
- антисмислового олігонуклеотиди;
- рібозіми і ДНКзіми;
- siRNA і miRNA.
В основі цих методів лежить використання коротких молекул нуклеїнових кислот (17 - 70 н.) з послідовністю, частково або повністю комплементарної ділянці мРНК - мішені. Загальні принципи дії таких агентів об'єднують їх і в області виникаючих проблем, серед яких найбільш гострими є доставка в клітку, стійкість до дії нуклеаз і ефективність взаємодії з мРНК-мішенню. Хімічні модифікації НК-агентів допомагають частково або повністю вирішити багато з цих проблем і підвищити ефективність дії агентів. p align="justify"> Вивчення механізмів придушення експресії гена, використовуючи компліментарні взаємодії вимагає використання методів аналізу, що дозволяють однозначно визначити антисмислового дію олігонуклеотидів.
Метою цієї роботи є відпрацювання методу придушення експресії гена EGFP в клітинах з використанням кон'югатів олігонуклеотиду з піреном. p align="justify"> 1. Модифікації антисмислових олігонуклеотидів (Літературний огляд)
Розробка лікарських препаратів, що дозволяють на рівні гена запобігати розвитку захворювань, викликаних експресією патогенних білків (вірусні, продукти онкогенів) або білків, що перешкоджають його лікуванню (MDR), призвела до появи і розвитку антисенс-техн...
