Теми рефератів
> Реферати > Курсові роботи > Звіти з практики > Курсові проекти > Питання та відповіді > Ессе > Доклади > Учбові матеріали > Контрольні роботи > Методички > Лекції > Твори > Підручники > Статті Контакти
Реферати, твори, дипломи, практика » Курсовые обзорные » Оптимізація методу придушення експресії гена EGFP З використанням кон'югатів антисмислового олігонуклеотиду і пірену

Реферат Оптимізація методу придушення експресії гена EGFP З використанням кон'югатів антисмислового олігонуклеотиду і пірену





n="justify"> 2 ; 75 мМ KClБуфер для ПЦР10 мМ Tris HCl, pH = 8,3; 1,5 Мm MgCl 2 ; 50 мМ KCl; 0,01% Tween-20Буфер для лізіса5 мМ Tris HCl, pH 7.8; 0.1% Nonidet P-40; 1 мM ЕДТАPBS10 мM Na 2 HPO 4 ; 2мМ KH 2 PO < span align = "justify"> 4 ; 0,15 M KCl; 0,14 M NaCl

2.4 Поділ олігонуклеотидів за допомогою ВЕРХ


ВЕРХ проводили на хроматографі В«Waters 2996В», на колонці довжиною 150 мм з звернуто-фазовим сорбентом Symmetry В® C 18 з діаметром мікрочастинок 5 мкм, в лінійному градієнті ацетонітрилу у воді (0 - 30%) у присутності 50 мМ LiCLO 4 ; швидкість потоку 1 мл/хв.


2.5 Електрофорез нуклеїнових кислот


.5.1 Електрофорез нуклеїнових кислот у ПААГ в денатуруючих умовах

В експериментах для раздененія реакційних сумішей і аналізу зміні рухливості олігонуклеотиду при кон'югації з лігандом використовували електрофорез в 12%, 16% і 18% поліакриламідному гелі (GFFU) при масовому співвідношенні N, N'-метіленбісакріламід/акриламід 20:1 у присутності 8 М сечовини і 1-кратного буфера TBE при напруженості електричного поля 15 - 45 В/см. При аналізі олігонуклеотидів і їх піренільних похідних гель фарбували в розчині В«Stains-AllВ» (0,5 г барвника В«Stains-AllВ» в 200 мл 50% водного формамід) протягом 10 хвилин у темряві. Знебарвлення гелю проводили у воді на яскравому світлі. br/>

2.5.2 Електрофорез нуклеїнових кислот у агарозному гелі

Поділ фрагментів ДНК - продуктів ПЛР, проводили за допомогою електрофорезу в 1,5% агарозному гелі в присутності 1-кратного буфера TBE і 0,002% (об'.) бромистого етидію при кімнатній температурі і напруженості електричного поля 5 - 10 В/см. Візуалізацію ПЛР продуктів проводили на трансіллюмінаторе за рахунок розгоряння флюоресценції молекул бромистого етидію при інтеркаляції дцДНК. br/>

2.6 Приготування цітавлонових солей олигонуклеотидов


Для отримання цітавлонових солей олігонуклеотиду готували розчин, що містить 1 - 6,5 о.е. олігодезоксірібонуклеотіди в 90 мкл води. Розрахунок додається в реакційну суміш 2% водного розчину цітавлона виробляли з урахуванням 2,5-кратного надлишку цітавлона по відношенню до сумарної кількості атомів фосфору в складі 5


Назад | сторінка 13 з 25 | Наступна сторінка





Схожі реферати:

  • Реферат на тему: Придушення експресії гена EGFP в клітинах з використанням кон'югатів ол ...
  • Реферат на тему: Структурна організація молекул нуклеїнових кислот
  • Реферат на тему: Електрофорез в хімії, біології, медицині та наукових дослідженнях
  • Реферат на тему: Процес алкілування на прикладі отримання етилбензолу у присутності каталіза ...
  • Реферат на тему: Вимірювання напруженості електромагнітного поля