сліджуваного матеріалу протягом 2-х годин при шуттелірованіі або 3-4 години без шуттелірованія при температурі 37 ° С, ми могли виявити лістерії в досліджуваному матеріалі в кількості 103 м.т./мл. Таким чином, ці режими підрощування ми вважаємо оптимальними. Для з'ясування оптимального часу контакту досліджуваного матеріалу з фагом було випробувано 5 параметрів. В результаті цих досліджень встановлено, що при культивуванні досліджуваного субстрату з фагом протягом 6:00 при температурі 28 ° С помітне наростання кількості лістеріозного фага спостерігається при концентрації гомологічних бактерій не менше 105 в мл. Подовження термінів інкубації/16-24 годину./Дало можливість отримати збільшення кількості фага в межах, що мають діагностичне значення вже при концентрації лістерій 102 до 103 м.т. в мл.
Виходячи з вище викладеного можна припустити, що значення інкубації сумішей протягом I6-24 годин при температурі 22 ° С або 28 ° С зводиться до того, що за цей час бактерії, що знаходяться в досліджуваному субстраті в дуже малих кількостях, розмножуються. В результаті цього між доданим індикаторним фагом і бактеріями встановлюються такі кількісні співвідношення, при яких імовірність зустрічі між ними підвищується і бактерії інфікуються фагом. Звідси випливає, що результат реакції залежить не тільки від властивостей індикаторного фага, а й від біологічних особливостей даного збудника, виявляють за допомогою РНФ.
При цьому, як пише А.П. Пехов/1962 /: Взаємодія фагів і бактерій являє собою складний біологічний процес, що характеризується повною залежністю біології фагів від біології бактерій і тісним зв'язком життя бактерій з розвитком фагів .
Раніше В.А. Тімакова і Д.М. Гольдфарбом (1960) було показано, що чутливість реакції є функцією часу і концентрації бактерій. З цього випливає, що, як і при виявленні інших мікроорганізмів, чутливість РHФ при експериментальному лістеріозі є функцією часу і концентрації бактерій. Подовження терміну контакту досліджуваного субстрату з фагом сприяє виявленню бактерій при незначному вмісті їх в об'єкті дослідження. Таким чином, з числа випробуваних pежимов найбільш швидким, але менш чутливим, є подращивание досліджуваного матеріалу протягом 3:00 при температурі 37 ° С з подальшим контактом досліджуваного матеріалу з фагом при температурі 28 0 протягом 8:00. Облік результатів проводять в цьому випадку через 24 години. Бактерії вдається виявити в кількості 103 м.т./мл/г /.
Найбільш чутливим, але більш тривалим, методом є витримування досліджуваного матеріалу з фагом/без попереднього підрощування/протягом 24 годин при кімнатній температурі або температурі 280 ° С. При даному режимі виявляються лістерії в концентрації 102 м.т. мл.г /, на проведення РНФ затрачається не більше 48 годин. Цей метод найбільш зручний у практичних умовах лабораторії.
Встановивши специфічність і спектр літичної активності лістеріозна фагів, і розробивши умови і режим постановки РНФ, необхідно було вивчити можливість використана РИФ для виявлення лістерій, насамперед, в органах і тканинах тварин. Для цієї мети були використані органи 20 кроликів і 11 овець, полеглих в результаті експериментального зараження культурою лістерій 1 і 2 серогрупп. В якості контролю в цих експериментах використовували органи від 10 інтактних (незаражених) тварин. Для підтвердження специфічності при виявленні лістерій в досліджуваних органах було проведено бактеріологічне дослідження. Лістерії в досліджуваних органах ідентифікували за допомогою лістеріозна бактеріофагів 2А і l 4А методами накапивнія і РНФ.
2. Протокол розтину
Розтин трупа кота вік 2 роки, кличка Барсик, безпородний, власник Забегайло, виробляли ветлікар Кондрущенкова С.Ю. у присутності головного ветлікаря станції Батирова А.А. в приміщенні операційної 19.11.2012 г.
Тварина було підібрано з вулиці навесні 2011 р, у віці близько 6 міс. У червні 2011 р кота кастрували. Кот містився в домашніх умовах, протягом останніх півтора років отримував сухі корми «Whiskas», «Kitekat», «Katinka», а також іноді рибу і м'ясо.
листопада 2012 власники кота помітили багаторазові, але безрезультатні спроби сечовипускання і загальне погіршення стану тварини (пригнічення, відмова від корму). 10 листопада 2012 кіт був доставлений для огляду і лікування на районну станцію по боротьбі з хворобами тварин (рег. № 197 з амбулаторного журналу).
При огляді об'єктивно було встановлено: ректальна температура 37,6 ° С, пульс 120 уд/хв., частота дихання 20 хв - 1; слизова оболонка ротової порожнини, кон'юнктива почервонілі; живіт роздутий, болючий при пальпації; в животі виявляється переповнений (? gt; 10 см) сечовий міхур; нирки збільшені, болючі при пальпації. Проведена катетеризація сечового міхура...
