ів інфекційних захворювань за допомогою бактеріофагів є дуже тонким методом, що перевершує по чутливості всі відомі імунологічні реакції, додамо крім ІФА, РІА.
Отримані результати досліджень з визначення специфічності та спектра літичної активності лістеріозна бактеріофагів 2А 4А показують, що вони відносяться до числа активних діагностичних фагів, що дають можливість ідентифікувати понад 90% культур лістерій. Крім того, різна активність фагів відносно лістерій 1 і 2 серогрупп, дозволяє використовувати їх з метою серогрупповой ідентифікації.
Отримані результати з вивчення специфічності бактеріофагів 2А і l 4А дозволили перейти до розробки оптимальних умов постановки РНФ для виявлення збудника лістеріозу в разлічниx субстратах. В першу чергу для постановки РНФ були випробувані різні поживні середовища. На підставі цих експериментів було показано, що середовище, що містить 0,5% глюкози забезпечує кращу репродукцію фагових корпускул і дозволяє враховувати результати РНФ на 6:00 раніше, ніж на середовищах без вмісту глюкози.
Зазначені висновки про залежність ефективності у проведенні РНФ від використовуваної живильного середовища збігаються з даними Н.А. Капирін/1974 /. Вона вважає, що инкубирование лістерій заражених фагом, в збагаченому середовищі, до числа яких належить і бульйон Мартена з глюкозою, сприяє не тільки інтенсифікації внутрішньоклітинного циклу розвитку вірусних частинок, але й підвищує кількісний вміст новоутворених нащадків фага в клітці.
Використання при постановці РНФ таких, загальнодоступних для будь бактеріологічної лабораторії, поживних середовищ як: МПБ 1,5 і 0,7% МПА з 0,5% глюкозою значно спрощує і полегшує застосування РНФ в порівнянні з методами бактеріологічного дослідження. Ефективність РНФ від складу поживних середовищ відзначали й інші дослідники: М.?? бдусаматов/1960 /, І.В. Дoмapaдcкій з співавт. (1958), С.Є. Філічкін (1965), В.Е. Шнейдерман (1963) при виявленні збудників дизентерії, черевного тифу, сальмонельозі, холери.
У наступних дослідах визначали кількісний показник лістеріозного фага, що має діагностичне значення. З літератури/Тімаков В.Д., Гольдфарб Д.М. 1962/відомо, що при виявленні дизентерійних бактерій РНФ вважають негативною, якщо збільшення кількості фага в дослідній пробі по порівняння з контрольною становить до 3 разів. Збільшення кількості фага від 3 до 5 разів враховується як слабо позитивна реакція; від 5 до 10 разів - позитивна, понад 10 - різко позитивна. При постановці діагнозу, методом РНФ, на черевний тиф Д.М. Гольдфарб, З.С.Островская/1957/вважали РНФ cлaбoположітельной, якщо збільшення кількості фага було лише в 2,5 рази. При збільшенні цього показника в 3-5 і більше разів РНФ діагноз вважали позитивним.
Для визначення кількості фага, що має діагностичне значення при виявленні збудника лістеріозу, було проведено понад двох сотень досліджень різних субстратів (МПБ, вода, грунт) контрольних і інфіковані культурою лістерій обох серогрупп в концентрації від 10 до 100 000 000 м.т. в мл.
У результаті проведених досліджень встановлено, що РНФ позитивна в разі, якщо кількість стерильних плям на чашках Петрі, засіяних з досвідчених проб, було в 5 рaз більше порівняно з контролями титру фагів.
Обраний критерій гарантував достовірність результатів, оскільки він дозволяв виключити технічні похибки при титруванні, при яких можливе виявлення невисокою ступеня збільшення кількості фага. Достовірність РНФ визначали шляхом виділення збудника лістеріозу бактеріологічним методом дослідження і специфічністю РНФ з контрольними пробами.
Вибравши живильне середовище для постановка РНФ і визначивши кількість фага, що має діагностичне значення при виявленні збудника лістеріозу в досліджуваних субстратах, були розпочаті дослідження з розробки режиму PНФ. Для цієї мети були поставлені експерименти з використанням двох основних модифікацій, які полягають в попередньому проращивании або збільшенні часу контакту досліджуваного матеріалу з фагом.
При відпрацюванні питань попереднього підрощування досліджуваного матеріалу використовували 7 режимів, що розрізняються за часом даного процесу (1, 2, 3, 4, 16 годин) і умовам аерації/шуттелірованіе /. Після попереднього підрощування до досліджуваного субстрату додавали певну кількість фага і суміш витримували при температурі 28 ° С протягом 8:00. В результаті цих досліджень було показано, що при підрощуванні досліджуваного матеріалу протягом 16 годин при температурі 37 С РНФ виявилася менш чутливою, оскільки дозволяла виявляти 105 м.т. в мл. Ймовірно, при настільки тривалої експозиції/16 годин/культивування при температурі 37 ° С сильно розвивається стороння мікрофлора, яка надає антагоністичну дію на лістерії.
При підрощуванні до...
