нь спектрофотометра в значення біомаси використовують калибровочную криву, що показує залежність оптичної щільності культури від концентрації біомаси (висушених клітин). Таким чином, Турбідіметрія служить високоточним і зручним методом непрямої визначення біомаси. Однак слід враховувати, що величини поглинання світла суспензіями окремих бактерій з клітинами різних розмірів можуть бути різними.
Рідше для визначення біомаси використовують нефелометрія - вимірювання світлорозсіювання під кутом 90 В° до падаючого пучку світла. Зверніть увагу, однак, що більша частина світу розсівається лише на невеликий кут, 2-12 В°. Це високочутливий метод, але він може давати помилкові результати за наявності в середовищі домішок у вигляді часток. Для точності вимірювань нефелометр необхідно часто калібрувати.
Визначення біомаси.
турбідіметрія як спосіб визначення біомаси в ряді випадків
непридатна (для культур з міцеліальних або поверхневим зростанням, для бактерій, що утворюють довгі нитки, агрегати і скупчення клітин, а також для змішаних культур, в яких варіює кількісне співвідношення видів); вимірювання кількості сирої біомаси дає зазвичай вельми неточні результати. У зв'язку з цим для вимірювання біомаси визначають масу висушених клітин. Відцентрифуговувати (або відфільтровану) і промиту водою біомасу висушують до постійної ваги в сушильній шафі при 105 В° С. Іншим способом сушіння служить ліофілізація. Суха речовина клітин становить зазвичай 10-20% їх сирої маси. Кількість біомаси можна також оцінити побічно за вмістом білка в культурі. Для цього клітини осаджують кислотою, після чого визначають білок за допомогою колориметрического методу. Співвідношення біомаси клітин і кількості в ній білка постійно тільки при, збалансованому зростанні, тобто коли склад клітин по мірі росту культури не змінювалася. Однак у більшості випадків це співвідношення змінюється в кінці експоненційної фази росту, а також при утворенні бактеріями великої кількості запасних речовин. Способом вимірювання росту може також служити визначення вмісту С або N в біомасі.
Метаболічні параметри, пропорційні зростанню.
Якщо зростання культури щодо збалансований і метаболізм НЕ роз'єднаний з біосинтезом, збільшення біомаси зручно контролювати з поглинання субстратів (наприклад, О2 або джерела вуглецю) або з освіти продуктів обміну (наприклад, СО2). Концентрацію газів найбільш просто визначити на вході і виході культиватора за допомогою мас-спектрометра, інфрачервоного абсорбційного спектроскопа або іншого приладу. Знаючи економічний коефіцієнт (відношення маси клітин до кількості спожитого субстрату) і метаболічні параметри росту, можна оцінити збільшення біомаси.
3.6. Підрахунок колоній.
Цей широко вживаний метод дозволяє визначати кількість життєздатних клітин, що утворюють на щільному середовищі видимі колонії. На одержу...
