тинчаста реакція аглютинації з Сапна кольоровим антигеном (РА).
Антиген сапной кольоровий для пластинчастої РА представляє собою гомогенну суспензію в буферному розчині інактивованої забарвленої культури збудника сапу. При зберіганні допускається утворення осаду, що переходить у гомогенну суспензію при струшуванні. Перед вживанні флакон з антигеном витримують протягом 15-20 хв. при температурі (18-30) гр.С і струшують. Випробувана сироватка крові коней, нативна або консервована. Консервування сироватки крові проводять кристалами борної кислоти (2-4% до обсягу сироватки) до отримання насиченого розчину або шляхом одноразового заморожування. p align="justify"> Чи не консервована сироватка крові придатна для дослідження протягом 5 діб з дня взяття крові із збереженням її при температурі (4-8) гр.С. Сироватка, консервована борною кислотою, придатна для дослідження протягом 10 діб, заморожена сироватка - протягом 3 діб після одноразового відтавання. Каламутні, пророслі, гемолізовані сироватки крові дослідженню на сап не підлягають. p align="justify"> Сироватка Сапна для РА і РСК (позитивна сироватка), виготовляється на біопідприємствах. Сироватка крові коней неспецифічна НЕ консервована (неготівная сироватка), виготовляється на біопідприємствах. Фізіологічний розчин -0,85%-ний розчин хлориду натрію рН 6,8-7,2. p align="justify"> Корекцію рН проводять 10%-ним розчином соляної кислоти або 10%-ним розчином гідроксиду натрію.
Постановка РА.
Реакцію проводять на чистих сухих металевих емальованих пластинках з лунками при температурі (18-30) гр.С. На бортах платівки проти кожної лунки записують номер досліджуваної сапной крові.
На початку роботи ставлять контроль антигену з позитивний сапной сироваткою і з негативною сироваткою крові коней, а також контроль антигену на спонтанну аглютинацію (до 0,03 куб.см антигену додають 0,03 куб.см сироватки або фізіологічного розчину). Досліджувані сироватки крові в дозі 0,03 куб.см вносять на дно лунки за допомогою шприца-напівавтомата або мікропіпеткі. Після внесення кожної сироватки шприц-напівавтомат (мікропіпетку) тричі промивають фізіологічним розчином і підсушують фільтрувальним папером. У кожну лунку поруч з сироваткою за допомогою шприца-напівавтомата або мікропіпеткі вносять 0,03 куб.см антигену. Потім антиген в кожній лунці ретельно змішують з сироваткою ручним змішувачем до отримання однорідної суміші, розподіляючи її по всій поверхні лунки. Платівку з сироватками з антигеном похитують протягом 4 хв. обережними обертальними рухами вручну або за допомогою апарату для похитування діагностичних пластинок. Облік результатів реакції проводять візуально через 4 хв. після змішування сироватки крові з антигеном при злегка похилому положенні платівки. Реакцію вважають позитивною при наявності чітко вираженої аглютинації забарвлених сапних бактерій антигену у ви...
