еного бензидина з утворенням забарвленого комплексу синьо-зеленого кольору.
У пробірку наливають 1 мл цільної крові, розведеної в 5000 разів, кип'ятять кілька хвилин на водяній бані, охолоджують і додають по 2 краплі розчину бензидину і пероксиду водню. Відзначають появу фарбування. p> б. Гваяковая проба на геміновую групу гемоглобіну. Метод заснований на здатності гемінової групи гемоглобіну каталізувати реакцію окислення гваякової смоляний кислоти пероксидом водню до її Озоніди, пофарбованого в синій колір. p> Хід визначення. У пробірку вносять кілька крапель цільної крові (розведеної в 5000 разів) і кип'ятять її протягом 1 хв на водяній бані. Після охолодження доливають до гатунку 1-2 краплі спиртового розчину гваякової смоляний кислоти і 3 краплі розчину пероксиду водню. Відзначають розвиток фарбування. p> в. Проба з Гексаціаноферрат (II) калію і роданідом амонію на залізо гемоглобіну. Метод заснований на здатності заліза, що входить в гемоглобін, утворювати з Гексаціаноферрат (II) калію в присутності соляної кислоти синьо-зелене комплексне з'єднання - берлінську лазур:
FeCl3 + 3K4 [Fe (CN) 6]? Fe4 [Fe (CN) 6] 3 + 12KCl,
гексаціаноферрат (II) берлінська калію блакить
а з роданидами - роданід заліза рожевого або червоного кольору
+ 3NH4CNS? Fe (CNS) 3 + 3KCl
роданід роданід амонію заліза
Хід визначення. Кілька крапель дефібринованої крові поміщають у фарфорову чашку (чаша) і випарюють досуха на піщаній бані. Сухий залишок озолюють, додають 2-3 краплі концентрованої азотної кислоти і продовжують нагрівання (під тягою). При цьому залізо гемоглобіну переходить до складу золи. p> Сухий залишок переносять у пробірку, додають 10 крапель розчину соляної кислоти до розчинення золи. Розливають вміст приблизно порівну в дві пробірки. В одну з них додають 2 краплі розчину гексаціаноферрата (II) калію. Спостерігають за появою характерного фарбування. У другу пробірку доливають 2 краплі розчину роданида амонію і відзначають розвиток специфічного фарбування. p> р. Поділ гемоглобіну на гем і глобін. Метод заснований на здатності ацетону, підкисленого соляною кислотою, розривати зв'язку між гемом і глобіном, причому відщепився гем розчиняється в ацетоні, а глобін випадає в осад. p> Хід визначення. У пробірку наливають 10 мл підкисленого ацетону і повільно додають 10 крапель розчину гемоглобіну. Спостерігають появу білуватою суспензії (глобін), яка поступово осідає. Вміст пробірки перемішують скляною паличкою, переливають у центрифужні пробірки і центрифугують при 1500 об/хв протягом 5 хв. p> Після центрифугування у верхній шар (ацетоновий) обережно опускають дві смужки фільтрувального паперу і проробляють реакції на наявність гемінової угруповання. Для цього на одну смужку наносять по краплі бензидина і розчину пероксиду водню (бензідіновая проба), на другу-по дві краплі спиртового розчину гваякової смоляний кислоти і розчину пероксиду водню (гваяковая проба). Відзначають поступове поява характерного фарбування на обох смужках паперу. p> Верхній шар рідини обережно зливають, а до залишився осаду додають 1 мл 3%-ного розчину гідроксиду натрію. Перемішують вміст і додають 10 крапель біуретового реактиву. Спостерігають появу характерного фарбування. p> Оформлення роботи. Результати оформити у вигляді таблиці. br/>
Компонент гемоглобінаВід реакцііХарактер фарбування
У висновках вказати на можливість виявлення гемоглобіну в досліджуваному матеріалі за допомогою пророблених якісних реакцій і розділення його компонентів дією кислих розчинів ацетону; відзначити значення реакцій для практики.
Практичне значення роботи. Основна частина гемпротеідов крові знаходиться у вигляді гемоглобіну еритроцитів. У сироватці або плазмі крові міститься лише незначна кількість гемпротеідов, що з'являються при значному розпаді еритроцитів (гемолізі). У сироватці крові залізо знаходиться у вигляді ферротрансферіна, що є складним білком (Металопротеїни), який переносить залізо між тканинами та органами. p align="justify"> Якісні реакції на простетичноїгрупи протеідов дозволяють виявити структурні компоненти: геміновую угруповання і входить до складу гема залізо. Для виявлення слідів крові дуже чутливі бензідіновая і гваякової проби використовуються в клініці і судово-медичних дослідженнях. br/>
Робота 10. Виявлення вуглеводного компонента глікопротеїдів
Глікопротеїди - це складні білки, що містять вуглеводний компонент. Він становить, як правило, приблизно 10-20% від маси всієї макромолекули. Виняток становлять так звані речовини груп крові, що містяться в еритроцитах. У цих глікопротеїдів вуглеводна частина становить до 80% від маси макромолекули. p align="justify"> У гликопротеидами вуглевод з білком з'єднаний ковалентним зв'язком. До складу небілкового фрагмента глікопротеїдів входять різн...
