Виділення ДНК з крові свиней і ВРХ.
. Статистична обробка отриманих результатів.
Особисто мені довелося брати участь у всіх перерахованих операціях.
Дослідження проводять на крові тварин, що надсилається з різних господарств НСО, а так само з сусідніх регіонів. Отримані дані використовуються в подальших наукових дослідженнях та їх статистичній обробці. Так само дані відсилаються в господарства, де вони використовуються для ведення відбору, підбору і вибракування тварин. br/>
. Виділення ДНК
На місці проходження виробничої практики використовували метод виділення ДНК з крові свиней та ВРХ за допомогою набору реагентів фірми В«МедігенВ» згідно інструкції, що додається до набору. Перед початком роботи необхідно було протерти пінцет, мікропіпеткі, робочий стіл і руки 70% розчином етанолу. p align="justify"> Для виділення ДНК за допомогою мікропіпеткі брали 100мкл зразка крові, попередньо струсивши пробірку зі зразком. До 100 мкл крові за допомогою мікропіпеткі додають 300 мкл розчину I, а потім - 10 мкл сорбенту, в якості якого використовувався рідке скло. Після цього суміш ретельно перемішували на Вертекс до гомогенного стану, а потім - інкубували при кімнатній температурі 10-15 хвилин. Потім центрифугували на мікроцентрифузі близько 60 секунд, після чого відбирали і відкидали супернатант. p align="justify"> Далі до осаду доливали 150 мкл розчину II, розбивали залишок на Вертекс і перемішували до гомогенного стану. Після цього - центрифугували на мікроцентрифузі близько 60 секунд, після чого відбирали і відкидали супернатант. Потім до осаду доливали 700 мкл розчину III, після чого розбивали залишок на Вертекс і перемішували до гомогенного стану. Після цього - центрифугували на мікроцентрифузі близько 60 секунд, після чого відбирали і відкидали супернатант. p align="justify"> Далі пробірки поміщали в мікротермостат і інкубували близько 30 хвилин (хоча в інструкції сказано - 5 хвилин!) з метою видалення залишків розчину III, що містить етанол, який є інгібітором наступних реакцій. Далі до осаду додавали 50 мкл стерильної води, перемішували на Вертекс до гомогенного стану і інкубували в термостаті 5 хв при температурі 55 0 С. Вода містила виділене ДНК, придатне для подальших ПЛР-реакцій.
3. Серологічні реакції
Реакції між антигенами і антитілами in vitro або серологічні реакції широко використовуються в мікробіологічних та серологічних (імунологічних) лабораторіях з найрізноманітнішими цілями:
В· серодиагностики бактеріальних, вірусних, рідше інших інфекційних захворювань,
В· сероідентіфікаціі виділених бактеріальних, вірусних та інших культур різних мікроорганізмів
серодіагностика проводять за допомогою набору специфічних антигенів, що випускаються комерційними фірмами. За результатами серодіагностіческіх реакцій судять про динаміку накопичення антитіл в процесі захворювання, про напруженість постинфекционного або поствакцинального імунітету. p align="justify"> Сероідентіфікацію мікробних культур проводять для визначення їх виду, серовара за допомогою наборів специфічних антисироваток, також випускаються комерційними фірмами.
Кожна серологічна реакція характеризується специфічністю і чутливістю. Під специфічністю розуміють здатність антигенів або антитіл реагувати тільки з гомологічними антитілами, що містяться в сироватці крові, або з гомологічними антигенами відповідно. Чим вище специфічність, тим менше хибнопозитивних і хибнонегативних результатів. p align="justify"> У серологічних реакціях беруть участь антитіла, що належать головним чином до імуноглобулінів класів IgG і IgM [6].
Реакції, що протікають з укрупненням антигену
Реакція аглютинації і її варіанти. Реакція аглютинації (agglutinacio - склеювання) зовні проявляється у склеюванні і випаданні в осад корпускулярних антигенів: бактерій, еритроцитів , а також часток з адсорбованими на них антигенами під впливом антитіл в середовищі з електролітом. Реакція протікає у дві фази. У першій фазі відбувається специфічна адсорбція антитіл на поверхні клітини або частки, що несе відповідні антигени, у другій - утворення агрегату (агглютіната) і випадання його в осад, причому цей процес відбувається тільки в присутності електроліту (розчин хлориду натрію). Механізм реакції аглютинації описується теорією В«гратВ», згідно з якою агглютінати утворюється при з'єднанні одного активного центру двовалентного антитіла з детерминантной групою одного антигену, а другого активного...
