ографіі
Всі молекули, розмір яких більше розміру пір сорбенту, не можуть потрапити в них (повна ексклюзія) і проходять по каналах між частинками. Вони елюіруются з колонки з одним і тим же утримуваним об'ємом, рівним обсягу рухомої фази Vo. Коефіцієнт розподілу для цих молекул дорівнює нулю.
Молекули проміжного розміру, здатні проникати тільки в якусь частину пір, утримуються в колонці відповідно до їх розміром. Коефіцієнт розподілу цих молекул змінюється в межах від нуля до одиниці і характеризує частку обсягу пір, доступних для молекул даного розміру. Їх утримуваний обсяг визначається сумою Vo і доступній частині обсягу пір:
V R = Vo + KdVi.
Звідси випливає ще одне суттєва відмінність ексклюзіонной хроматографії: в даному методі поділ закінчується до виходу піку розчинника, в той час як в інших варіантах ВЕРХ компоненти суміші елюіруются після піку розчинника. p> Параметр k 'в ексклюзіонной хроматографії зазвичай не використовують. Його можна виразити рівнянням
k '= KdVi/Vo.
Для більшості сучасних сорбентів Vi ≈ Vo, тому k '≈ Kd.
Зв'язок між утримуваним об'ємом і молекулярною масою (або розміром молекул) зразка описується калібрувальної кривої (рис. 2.16). Кожен сорбент характеризується своєю калібрувальної кривої, по якій легко оцінити область поділюваних на ньому молекулярних мас. Точка А відповідає межі ексклюзії, або мертвому обсягом колонки Vo. Всі молекули, маса яких більше, ніж у точці А, будуть елюіровать одним піком з утримуваним об'ємом Vo. Точка В відбиває межа проникнення, і всі молекули, маса яких менше, ніж у точці В, також будуть виходити з колонки одним піком з утримуваним об'ємом Vt. Між точками А і В розташовується діапазон селективного розділення. Відповідний йому обсяг Vi = Vt-Vo часто називають робочим об'ємом колонки. Відрізок CD являє собою лінійний ділянка калібрувальної кривої, побудованої в координатах VR-IgM. Ця ділянка описується рівнянням
Vr = C1 - C2lgM,
де C1 - відрізок, що відсікається на осі ординат продовженням відрізка СD, C2 - тангенс кута нахилу цього відрізка до осі ординат.
Величину С2 називають розділової ємністю колонки; її виражають числом мілілітрів розчинника, припадає на один порядок зміни молекулярної маси. Чим більше розділова ємність, тим селективності розділення в даному діапазоні мас. У нелінійних областях калібрувальної кривої (ділянки АС і BD) у зв'язку зі зменшенням С2 ефективність фракціонування помітно знижується. Крім того, нелінійна зв'язок між IgM і Vr істотно ускладнює обробку даних і знижує точність результатів. Тому завжди потрібно прагнути вибирати колонку (або набір колонок) так, щоб поділ аналізованого полімеру протікало в межах лінійної ділянки калібрувальної кривої.
Якщо яка-небудь речовина елююють з утримуваним об'ємом більше Vt, то це вказує на прояв інш...
