і вивчали вплив гіпоосмотіческая навантаження на обсяг гемоцитів. Отриману гемолімфу ділили на три частини, кожну з яких поміщали в окрему чашку Петрі. До кожної частини гемолімфи додавали 10 мкл розчину NaCl певної концентрації (ізотонічний розчин - 0.97% NaCl, сільногіпотоніческій - 0.24% NaCl) для визначення мембранного резерву.
Інкубацію проводили протягом 1 хвилини. Далі вивчали прижиттєві особливості клітин, їх морфометричні показники за допомогою оптичного інвертованого мікроскопа Nikon Digital Eclipse Ti-E. Отримували фотографії в режимі реального часу і проводили лінійні виміри, застосовуючи аналізатор зображень «Відео-Тест».
Гемоцити мають відносно еліпсоїдну форму, тому вимірювали велику, середню і малу вісь. Використовуючи значення цих лінійних розмірів, розраховували площу поверхні клітин та їх обсяг.
Формули для розрахунку показників:
s=4п [(арЬр + АРСР + Ьрср) / 3] р V=4/3 (nabc),
де S - площа поверхні гемоцитів, V - об'єм, а - велика піввісь, b - мала піввісь, с - середня піввісь, p=1,6075 - коефіцієнт К. Томсена.
Розраховували абсолютну величину мембранного резерву як різниця між площею поверхні клітини в сильно гипотоническом розчині і площею поверхні клітини в ізотонічної середовищі.
AS=S (CT)-S (^,
де AS - резерв плазматичної мембрани (ДШ2); S (CT ') - площа поверхні клітини, після інкубації в сильно гипотонической середовищі (дш 2); S ^) - площа поверхні клітини, після інкубації в ізотонічної середовищі (дш 2).
Для визначення частки використовуваного мембранного резерву (MR) використовували наступну формулу:
(AS / S (CT)) - 100%,
де AS - резерв плазматичної мембрани (ДШ2); S (CT ') - площа поверхні клітини, після інкубації в сильно гипотонической середовищі (дш 2);
Отримані дані обробляли з використанням методів варіаційної статистики.
Результати та їх обговорення
Мембранний резерв, який визначається ступенем складчастості плазмалемми, є однією з найважливіших морфофункціональних особливостей клітин крові. Він використовується фагоцитами при утворенні псевдоподий при амебоідному руху і захопленні чужорідних об'єктів в ході захисних реакцій. У підтримці функціональної активності формених елементів крові велике значення має система саморегуляції об'єму клітин і пружні властивості гемоцитів [7, 8]. Роботи з вивчення величини мембранного резерву ядерних клітин гемолімфи комах до теперішнього часу не проводилися.
У нормі більшість клітин багатоклітинних організмів знаходяться в ізотонічних умовах. Зміни концентрації внутрішньо-або позаклітинного розчинів призводять до виникнення трансмембранного градієнта осмотичного тиску. Оскільки плазмалемма проникна для води, то це призводить до переміщення розчинника в клітину або з неї. Таким чином, відбувається або збільшення, або зменшення об'єму клітини.
Проведена інкубація гемоцитів досліджуваних видів в ізотонічної і сільногіпотоніческой середовищах. Визначили площа і об'єм гемоцитів, інкубованих в різних розчинах.
У B. craniifer найбільше збільшення обсягу в сильно гипотоническом розчині відбувалося у гемоцитів типу 3 і 5. Для останнього характерно збільшення лінійних розмірів тільки по короткій осі.
Значне збільшення обсягу клітин у відповідь на гіпоосмотіческая навантаження у гемо-цитов типу 3 і 5 пов'язано з високою фагоцитарної а...
