ою. Антисироватка в розведенні, відповідному титру, але не нижче, ніж 1:1000, повинна повністю пригнічувати аглютинацію курячих еритроцитів/0,5%/при дозі вірусу, рівної 4АЕ.
Отримання первинно-трипсінізірована, культур шкірно-мншечной тканини курячих і людських ембріонів.
Культури шкірно-мьшечной тканини курячих і людських ембріонів широко використовують у виробництві інтерферону для контролю вірусів, а також для визначення відсутності токсичності та противірусної активності препарату. Успішна робота виробництва в значній мірі залежить від рівня ведення культур клітин.
Для отримання культур клітин застосовують стандартні методи, засновані на дезінтеграції тканини ембріона трипсином. При вирощуванні культур слід звернути найсерйознішу увагу на якість середовищ, сироватки, допоміжних розчинів і чистоту посуду.
Отримання культури курячих фібробластів
Джерелом тканини є 9-10-денні курячі ембріони з дотриманням умов суворої стерильності ембріон витягують з шкаралупи на стерильну чашку Петрі. Відбирається шкірно-м'язова тканина, переноситься в колбу Ерленмейера і промивається розчином Хенкса з антибіотиками (50 од/мл пеніциліну + 100 од/мл стрептоміцину або 20 од/мл мономіцііа). Промивні води зливають і тканина подрібнюють, розміри шматочків 1-5 мм. Потім тканину заливають підігрітим до 37 В° С розчином трипсину (0,2%), розведеним розчином Хенкса (1:1). Колбу з тканиною поміщають на магнітну мішалку, включають обертання. Через 5 хв. обертання припиняють і після осідання шматочків тканини надосадову рідину зливають з дотриманням умов ст рогой стерильності. У колбу знову заливають підігріту до 37 В° С суміш розчинів трипсину і Хенкса. Суспензію перемішують 5-7 хв. Потім обертання зупиняють і після осідання великих шматочків тканини надосадову рідина переливають у стерильні центрифужні склянки з пробкою. Суспензій центрифугують при 1250 об/хв, протягом 10 хв. Супернатант відкидають, а осад клітин суспендують в культуральній рідині наступного складу: середа № 199 - 30%, гідролізат лактальбуміну - 50%, нормальна бичача сироватка - 20% і антибіотики.
Таку операцію тріпсінізаціі повторюють 4-6 разів, але клітини збирають в один флакон з культуральної рідиною.
Після закінчення збору суспензію ретельно перемішують і клітини підраховують у лічильній камері Горяєва. Суспензію розводять культуральної рідиною до такого ступеня, щоб в I мл містилося 650 000 -750 000 клітин. Потім суспензію розливають у стерильні пробірки по I мл і інкубують при 37 В° С протягом 2-3 діб, до утворення моношару клітин.
Технологічний процес виготовлення лейкоцитарного інтерферону підрозділяють на 7 стадій і 12 операцій,
Стадія 1 - Виділення лейкоцитів.
Біосинтез інтерферону проводять з використанням лейкоцитів, звільнених від домішки еритроцитів. У тих випадках, коли домішка еритроцитів перевищує 100 клітин на I лейкоцит, наприклад, в еритромаси для їх відділе...
