ртного розчину рибофлавіну переносять у мірну колбу місткістю 100, доводять об'єм дистильованою водою до мітки і ретельно перемішують.
Концентрація робочого стандартного розчину рибофлавіну складе 1 мкг /.
Розчин готують в день проведення аналізу.
Проведення випробування.
Рибофлавін визначають у двох парал лельного наважках продукту.
Гідроліз: наважку продукту масою 10,0 г поміщають в колбу місткістю 250 і доливають 150 розчину соляної кислоти концентрації 0,1 моль /.
Гідроліз здійснюють на киплячій водяній бані протягом 40 хв. закривши горло колби воронкою діаметром 35 мм. p> Вміст колби слід періодично перемішувати, особливо в перші 5 хв.
По закінченні гідролізу колбу охолоджують до кімнатної температури і за допомогою насиченого водного розчину оцтовокислого натрію доводять рН гідролізату до 4,5 В± 0,1 (потенціометрично).
Після цього до гідролізату додають наважку Амілорізін масою 0,10 г, 2 -3 краплі толуолу і потім колбу поміщають у термостат на 14-16 год при температурі 37 В° С. Після цього гідролізат охолоджують, доводять його об'єм до 250 дистильованою водою і фільтрують. У фільтраті визначають зміст рибофлавіну. p> Якщо є необхідність перервати аналіз на 1-2 дні, то перед доведенням об'єму до 250 гідролізат кип'ятять 5 хв, охолоджують, доводять об'єм до 250 і фільтрують.
Одночасно аналогічним чином готують контрольний розчин на утримання рибофлавіну в Амілорізін, використовуючи те ж кількість ферментного препарату і реактивів, але без навішування досліджуваної проби.
До проведення аналізу фільтрат зберігають у холодильнику в щільно закритій колбі.
Очищення гідролізат а від домішок, що заважають визначенню
До 100 фільтрату додають 2 розчину сірчаної кислоти концентрації 0,3 г/і за допомогою піпетки або бюретки по краплях розчин марганцевокислого калію концентрації 0,03 г /, постійно перемішуючи до отримання малинового фарбування.
Надлишок марганцевокислого калію видаляють додаванням по краплях розчину перекису водню до знебарвлення фільтрату.
Кількість витрачених розчинів сірчаної кислоти, марганцевокислого калію і перекису водню (у кубічних сантиметрах) приплюсовують до спочатку взятому на окислення обсягом фільтрату, щоб визначити кінцевий об'єм розчину.
Отриманий розчин переносять в ділильну воронку, додають 30-50 хлороформу і струшують протягом 1 хв. Після поділу шарів хлороформний шар (нижній) відкидають, а водну фазу використовують для подальшого визначення. p> Фотоліз: проводять у п'яти конічних колбах з притертими пробками.
У чотири колби наливають по 20 очищеного гідролізату, у дві з яких додають по 2 робочого стандартного розчину рибофлавіну.
У п'яту колбу наливають 20 контрольного розчину.
У всі п'ять колб додають по 4 розчину гідроксиду натрію концентрації 7 моль /, закривають колбу пробками, перемішують вміст і опромінюють їх ...
