світлом двох світильників з лампами розжарювання по 100 Вт кожна з відстані 30 см протягом 40 хв.
Температура повітря має бути не більше 25 В° С. Для підтримки зазначеної температури повітря використовують настільний вентилятор. p> Негайно після закінчення опромінення розчини у всіх колбах подкисляют 4 крижаної оцтової кислоти, додають до них по 20 хлороформу, закривають притертими пробками і струшують протягом 2 хв, уникаючи утворення емульсії.
Потім всі колби залишають на 10-15 хв для розшарування водної та хлороформно фаз.
Після цього піпеткою відбирають по 10-12 хлороформного розчину (нижній шар), який фільтрують через паперовий фільтр з безводним сірчанокислим натрієм в флюорометріческіе пробірки.
Час з моменту початку фільтрації розчину люміфлавін до вимірювання його флюоресценції не повинно перевищувати 30 хв.
Вимірювання флюоресценції хлороформного розчину
При роботі на флюорометре марки ЕФ-ЗМА встановлюють світлофільтри для вітаміну В2.
При роботі на флюорометре марки ФМ-Ц-2 встановлюють світлофільтри, що дають довжини хвиль збудження і флюоресценції 450 і 550 нм відповідно.
Вимірювання інтенсивності флюоресценції розчинів здійснюють по відношенню до хлороформу.
При роботі на флюорометрах інших марок інтенсивність флюоресценції люміфлавін вимірюють при світлофільтрах, що дають довжини хвиль збудження в області 350-480 нм, флюоресценції - 475-650 нм.
Обробка результатів
Масову частку рибофлавіну (Х), мг на 100 г продукту, обчислюють за формулами
або
де А - інтенсивність флюоресценції випробуваного розчину без додавання стандартного розчину рибофлавіну, середнє з двох паралельних визначень, од. приладу;
А1 - інтенсивність флюоресценції контрольного розчину, од. приладу;
А2 - інтенсивність флюоресценції випробуваного розчину з додаванням стандартного розчину рибофлавіну, середнє з двох паралельних визначень, од. приладу;
Х1 - масова частка доданого рибофлавіну, мкг:
m - маса проби продукту, використовувана для випробування, г; - загальний обсяг гідролізату,; - обсяг гідролізату після окислення,; - обсяг гідролізату, використовуваний для очищення від домішок,; - обсяг гідролізату, використовуваний для опромінення,;
- коефіцієнт перерахунку з мкг/г в мг на 100 г продукту;
- коефіцієнт, що включає постійні величини: Х1 = 2 мкг;
m = 10 г; V - 250, V2 = 100, V3 = 20 і коефіцієнт перерахунку = 10.
Обчислення проводять із точністю до третього десяткового знака з наступним округленням до другого десяткового знака.
Отриманий результат повинен бути в діапазоні 0,10-0,60 мг/100 г продукту. В іншому випадку випробування повторюють з уточненою навішуванням продукту. p> За остаточний результат випробування приймають середньоарифметичне значення () результатів двох паралельних визначень, допустиме розходження (d) між якими в мг/100 г не повинн...
