ДорожкаСпраймера, мкМСdNTP, мкМ В«8В» 0,5250 В«4В» 0,350
Умови В«4В» більш кращі зважаючи меншої кількості неспецифічних продуктів, а також меншої витрати реагентів.
Таким чином, оптимальні умови для виявлення EGFP методом ЗТ-ПЛР можна підсумувати в табл. 9. br/>
Таблиця 9. Оптимальні умови проведення ПЛР. p align="justify"> Прямий праймерEGFP-5Обратний праймерEGFP-6Концентрація праймерів в РС0, 3 мкМКонцентрація dNTP в РС50 мкМКонцентрація Mg2 + у РС1, 5 мМТемпература відпалу 59,5 Вє З Висновки
1. Здійснено синтез кон'югатів олігодезоксінуклеотідов з піреном. Показано, що використовувані умови реакції призводять до отримання моно-перінільних кон'югатів з високим виходом.
2. Проведено порівняння двох методів виділення сумарної РНК з клітин. Показано, що виділення сумарної РНК з клітин з використанням фірмового набору здійснюється простіше, швидше і з великим виходом, проте містить домішки ДНК і вимагає стадії обробки ДНКаза. Виділення РНК з використанням екстракції сумішшю фенол-хлороформ більше часу, витрат Турда і має менший вихід, проте призводить до отримання чистого продукту.
. Для оцінки біологічної дії антисмислових оліогуклеотідов обраний метод заснований на ПЛР. Був проведений вибір праймерів до кДНК гена EGFP виходячи з оцінки термодинамічних параметрів можливих структур, формованих ними в розчині і умов взаємодії з мішенню з наступним тестуванням їх в умовах експерименту. Для найбільш ефективної пари праймерів проведена оптимізація умов ПЛР та визначено оптимальні параметри.
Список літератури
1.A.D. Branch (1996). A Hitchhikers Guide to Antisense and Nonantisense Biochemical Pathways. Hepatology , 24: 1517-1529.
2.U. Galderisi, A. Cascino, A. Giordano (1999). Antisense Oligonucleotides as Therapeutic Agents. J. Cell. Physiol , 181: 251-257
. M. Manoharan (2002). Oligonucleotide Conjugates as Potential Antisense Drugs with Improved Uptake, Biodistribution, Targeted Delivery, and Mechanism of Action . Antisense & nucleic acid drug development , 12:103-128
. I.M. Lagoja, P. Hedrdewijn (2007). Use of RNA in drug design. Expert Opin. Drug Discov. 2 (6): 889 - 903. p>. C.M. Roth, M.L. Yarmush (1999). Nuclear acid biotechnology. Annu. Rev. Biomed. Eng . 01:265-297
. Byong Hoon Yoo, Elena Bochkareva, Alexey Bochkarev, Tung-Chung Mou, Donald M. Gray (2004). 2-O-methyl-modified phosphorothioate antisense oligonucleotides have reduced non-specific effects in vitro. Nucleic Acids Research , 32 (6): 2008 - 2016.
. Chrissy E. Prater, Paul S...
