С. p>
Стадія 4. Відділення індукованих лейкоцитів. На стадії індукції завершують підготовчі етапи інтерфероногенезу.
Для поліпшення переносимості препарату, після індукції необхідно видалення культуральної рідини неадсорбованими частинок вірусу-індуктора і антигенів курячої аллантоісной рідини. Для цих цілей виявилося доцільним відділення індукованих лейкоцитів і переведення їх в середу нового складу. p> Операція 7. Відділення індукованих лейкоцитів.
Суспензію індукованих лейкоцитів центрифугують при 600хД 15 хв 4 В° С, або сепарують в умовах стерильності. Супернатант відбирають у окрему ємність для знезараження, а осад клітин суспендують в живильному середовищі наступного складу: середа № 199 або мінімальна "Голка", 3 од/мг гепарину, 5% плазми або сироватки донорської крові, мономіцин 50 од/мл, рН 7,2-7,4/Середа № 2 /. p> Стадія 5. Біосинтез
Біосинтез інтерферону проводять в стаціонарній культурі лейкоцитів. При цьому відбувається вельми міцне прикріплення лейкоцитів до поверхні культурного судини. Виявилося, що найважливішим параметром, що визначав вихід активності, при стаціонарному культивуванні є щільність посадки, то Тобто кількість клітин на одиницю поверхні. Експериментально встановлено, що оптимальним для інтерфероногенезу є щільність в 5-7 млн ​​лейкоцитів на I см поверхні. Показово, що при такій щільності посадки лейкоцити створюють пласт завтовшки в 3 клітини. Хорошому прикріпленню клітин сприяє нанесення на внутрішні поверхні культурального судини гідрофобного покриття - силікону будь-якої марки.
Для забезпечення живильної потреби культури абсолютно достатньо 0,1 л середовища № 2 на I млн лейкоцитів. Основою енергетичного обміну для лейкоцитів є анаеробний гліколіз. Через дефектності ферментних систем початкових стадій циклу Кребса, окислення глюкози в цих клітинах завершується на стадії лактату і лише невелика кількість (в межах 3%) піддається подальшому розщеплення. Тому, обсяг повітряної фази в культуральному посудині мало впливає на вихід активності. Однак, заповнення середовищем культурального посудини, більш ніж на половину його об'єму не рекомендується.
Зазначені вище рекомендації слід використовувати при складанні клітинної суспензії в конкретних умовах.
Для кожного типу культурального судини необхідно підібрати оптимальні співвідношення кількості клітин і середовища № 2 (зберігши і газову фазу), враховуючи виходи активності і економічність процесу біосинтезу. p> Операція 8. Стаціонарне культивування індукованих лейкоцитів.
У матриці, з суворим дотриманням стерильності, заливають розраховане кількість середовища № 2 і вводять необхідну кількість лейкоцитів. Перекривають матриці стерильними пробками, суспензію клітин ретельно перемішують і встановлюють матриці в соответствующе положення (норма "ребро") на стелажі термального приміщення з температурою 37 В° С. Культивування продовжують 18-20 годин. Д...
