ься велике значення і приділяється величезна увага як виробниками колонок, так і їх споживачами. Це пов'язано з тим, що для складних багатокомпонентних сумішей, особливо сумішей невідомого складу, часто вже не вдається підібрати умови так, щоб селективність була високою для всіх компонентів. У цьому випадку висока ефективність колонки дозволяє домогтися поділу для пар речовин з невеликим значенням О±.
1.2 Розмивання У Колонки і ПОЗА ЇЇ
Речовини вводяться в колонку у вигляді вузької зони, яка в міру її руху з рухомою фазою по колонці стає все ширше, тобто розмивається внаслідок дифузійних процесів. Мірою цієї розмивання у колонці є висота, еквівалентна теоретичній тарілці (ВЕТТ). Встановлено, що розмивання смуги в хроматографічної колонці обумовлено трьома причинами: наявністю вихровий дифузії, молекулярної дифузії і опору массопередачи. Загальна ВЕТТ ( H ) колонки виходить шляхом підсумовування внесків всіх цих факторів, що викликають розмивання хроматографічної зони:
H = Hp + Hd + Hs + Hm ,
де Нр - внесок у розмивання вихровий дифузії; На - внесок у розмивання молекулярної дифузії; Hs - внесок, пов'язаний з опором массопередачи в нерухомій фазі; Нт - внесок, пов'язаний з опором массопередачи в рухомій фазі.
Не вдаючись у докладний розгляд цих вкладів у ВЕТТ, проте слід зауважити, що чим менше кожне з чотирьох доданків, тим менше буде і сумарне значення ВЕТТ і, отже, ефективніше колонка. Величина Нр пропорційна діаметру частинок сорбенту і зменшується з поліпшенням рівномірності заповнення
В
Рис. 1.4. Залежність ВЕТТ від швидкості подачі розчинника (V, мл/хв). br/>
Внесок у розмивання піку різних факторів колонки сорбентом. Величина Hd росте при використанні дуже малих швидкостей потоку, при звичайно використовуваних високих швидкостях Hd настільки мала, що нею можна знехтувати. Величина Нm зменшується при прискоренні процесів адсорбції - десорбції в нерухомій фазі, тобто при використанні частинок малого розміру і тонких плівок нерухомої фази, при зменшенні швидкості потоку. Величина Нm зменшується при зменшенні розміру частинок (Пропорційно квадрату діаметра частинок), більш рівномірному і щільному заповненні колонки сорбентом, менш в'язкому розчиннику, менших швидкостях потоку.
Якщо зобразити графічно залежність ВЕТТ від швидкості подачі розчинника, то вона буде мати вигляд, зображений на рис.1.4. На ньому можна бачити і оцінити внесок кожної зі складових у значення ВЕТТ.
Таким чином, розмивання у колонці зменшується і ефективність підвищується, коли використовують більш дрібний сорбент, більш рівномірний за складом (вузька фракція), більш щільно і рівномірно упакований у колонці, при використанні більш тонких шарів прищепленої фази, менш в'язких розчинників і оптимальних швидкостей потоку.
Однак поряд з розмиванням смуги хроматографічної зони в процесі поділу у колонці може відбуватися також і розмивання її в пристрої для введення проби, в сполучних капілярах інжектор - колонка і колонка - детектор, в комірці детектора і в деяких допоміжних пристроях (мікрофільтри для уловлювання механічних частинок з проби, встановлювані після інжектора, перед-колонки, реактори-змійовики і ін.) Розмивання при цьому тим більше, чим більше внеколоночний обсяг за порівняно з утримуваним об'ємом піку. Має також значення і те, в якому місці знаходиться мертвий об'єм: чим вже хроматографічна зона, тим більша розмивання дасть мертвий обсяг. Тому особливу увагу слід приділяти конструюванню тієї частини хроматографа, де хроматографічна зона найбільш вузька (інжектор і пристрою від інжектора до колонки) - тут внеколоночное розмивання найбільш небезпечно і позначається найбільш сильно. Хоча вважається, що в добре сконструйованих хроматографах джерела додаткового внеколоночного розмивання повинні бути зведені до мінімуму, проте кожен новий прилад, кожна переробка хроматографа повинні обов'язково закінчуватися тестуванням на колонці і порівнянням отриманої хроматограми з паспортної. Якщо спостерігається спотворення піку, різке зниження ефективності, слід ретельно проінспектувати знову введені в систему капіляри та інші пристрої. Розмивання поза колонки і його неправильна оцінка можуть призвести до значної (більше 50%) втрати ефективності, особливо в тих випадках, коли відносно давно сконструйовані хроматографи намагаються використовувати для високошвидкісної ВЕРХ, мікроколоночной ВЕРХ та інших варіантів сучасної ВЕРХ, що вимагають мікроінжекторов, з'єднувальних капілярів з внутрішнім діаметром 0,05-0,15 мм мінімальної довжини, колонок місткістю 10-1000 мкл, детекторів з мікрокювет ємністю 0,03-1 мкл і з високою швидкодією, високошвидкісних самописців і інтеграторів.
1.3 Утримуван...
