ня і СИЛА розчинником
Для того щоб аналізовані речовини поділялися на колонці, як уже згадувалося вище, коефіцієнт ємності k ' повинен бути більше 0, тобто речовини повинні утримуватися нерухомою фазою, сорбентом. Однак коефіцієнт ємності не повинен бути і занадто великим, щоб отримати прийнятний час елюювання. Якщо для даної суміші речовин обрана нерухома фаза, яка їх утримує, то подальша робота з розробки методики аналізу полягає у виборі такого розчинника, який забезпечив би в ідеальному випадку різні для всіх компонентів, але прийнятно не дуже великі k '. Цього домагаються, змінюючи елююють силу розчинника. p> У разі адсорбційної хроматографії на силікагелі або оксиді алюмінію, як правило, силу двокомпонентного розчинника (наприклад, гексану з добавкою изопропанола) збільшують, збільшуючи в ньому вміст полярного компонента (изопропанола), або ж зменшують, зменшуючи вміст изопропанола. Якщо зміст полярного компонента стає занадто малим (менше 0,1%), слід замінити його більш слабким по елююють силі. Так само роблять, замінюючи на інші або полярну, або неполярну складову і в тому випадку, якщо дана система не забезпечує бажаної селективності по відношенню до цікавлять компонентам суміші. При підборі систем розчинників беруть до увагу як розчинності компонентів суміші, так і елюотропние ряди розчинників, складені різними авторами.
Приблизно так само підбирають силу розчинника у випадку використання щеплених полярних фаз (нітрил, аміно, діол, нітро та ін), враховуючи можливі хімічні реакції і виключаючи небезпечні для фази розчинники (наприклад, альдегіди і кетони для амінофази).
У разі звернення-фазною хроматографії силу розчинника збільшують, підвищуючи вміст у елюенті органічною складовою (Метанолу, ацетонітрилу або ТГФ) і зменшують, додаючи більше води. Якщо не вдається добитися бажаної селективності, використовують іншу органічну складову або намагаються змінити її з допомогою різних добавок (кислот, іон-парних реагентів та ін.)
При поділах методом іонообмінної хроматографії силу розчинника міняють, збільшуючи або зменшуючи концентрацію буферного розчину або змінюючи рН, в деяких випадках використовують модифікацію органічними речовинами.
Однак, особливо у випадку складних природних і біологічних сумішей, часто не вдається підібрати силу розчинника таким чином, щоб всі компоненти проби елюіровать за прийнятний термін. Тоді доводиться вдаватися до градиентному Елюювання, тобто використовувати розчинник, елююють сила якого в процесі аналізу змінюється так, що вона постійно збільшується за заздалегідь заданою програмою. Таким прийомом вдається домогтися елюювання всіх компонентів складних сумішей за відносно короткий проміжок часу і їх поділу на компоненти у вигляді вузьких піків.
1.4 РОЗМІР ЧАСТИНОК СОРБЕНТУ, ПРОНИКНІСТЬ І ЕФЕКТИВНІСТЬ
Розглядаючи розмивання у колонці, ми вказували, що ефективність колонки (ВЕТТ) залежить від розміру часток сорбенту. У великій мірі бурхливий розвиток ВЕРХ за передні 10-12 років було обумовлено, по-перше, розробкою способів отримання сорбентів з розміром частинок від 3 до 10 мкм і з вузьким фракційним складом, що забезпечують високу ефективність при хорошою проникності, по-друге, розробкою способів заповнення цими сорбентами колонок і, по-третє, розробкою і серійним випуском рідинних хроматографів, мають розраховані на високі тиску насоси, інжектори і детектори з кюветами малого обсягу, здатні реєструвати піки малого обсягу.
Для добре упакованих суспензійним способом колонок приведений-ная висота, еквівалентна теоретичній тарілці (ПВЕТТ), може становити 2 незалежно від того, чи використовували для пакування частинки з розміром 3, 5, 10 або 20 мкм. У цьому випадку ми отримаємо відповідно колонки (при стандартній довжині їх 250 мм) ефективністю 41670, 25000, 12500 і 6250 т.т. Здається природним вибрати найбільш ефективну колонку, заповнену частками розміром 3 мкм. Однак за цю ефективність доведеться заплатити використанням при роботі дуже високого тиску і відносно невисокою швидкістю поділу, тому що наявний насос, швидше за все, буде нездатний прокачувати через таку колонку розчинник з високою об'ємною швидкістю. Тут ми якраз і стикаємося з питанням про зв'язок розміру часток сорбенту, ефективності та проникності колонок.
Рівняння, яке пов'язує тиск, розмір часток і інші важливі хроматографічні параметри, має наступний вид:
В
u = K 0 p / О·L = pd c 2 / П† О·L
де u - лінійна швидкість потоку, що визначається з рівняння t o = L/u ; До 0 - проникність колонки; р - тиск; О· - в'язкість; L - довжина колонки; П† - фактор опору колонки.
Якщо виразити звідси фактор опору колонки - безрозмірну величину, от...
