ня не втрачають здатності до розмноження [13].
Осматіческое тиск середовища також є важливим чинником, що обумовлює нормальну життєдіяльність клітин тварин в культурі. У поживних середовищах, так само як і в рідинах тваринного організму, воно визначається концентрацією неорганічних солей, і в першу чергу хлористого натрію. Однак органічні речовини, особливо низькомолекулярні, як, наприклад, глюкоза, також впливають на осматіческое тиск середовища. Для клітин ссавців нормальне осматіческое тиск при 38 0 одно близько 7,6 атм (відповідає тиску при точці замерзання близько - 0,63 0). Клітини легко переносять коливання тиску в межах ± 10%. Насправді клітина може переносити значно більші коливання тиску, якщо вони відбуваються не дуже швидко. Слід підтримувати нормальний тиск без особливих коливань [11].
Концентрація водневих іонів відіграє виняткову роль у забезпеченні нормального метаболізму клітин. Клітини теплокровних тварин розмножуються найбільш інтенсивно при нейтральному рН (6,9 - 7,1), хоча їх розмноження не припиняється при зсуві рН в кислу або лужну сторону (6,8 - 7,6). Слід зазначити, що найбільш терпимі до зміни рН культури клітин і органів і меншою мірою одношарові культури клітин. Клітини, що ростуть в суспензії, вельми чутливі до відхилення рН за межі кордонів оптимального росту.
Це пояснюється тим, що в одношарової культурі і особливо в культурі клітин органів, клітини створюють на своїй поверхні «мікроклімат», який дещо відрізняється від навколишнього живильного середовища, в тому числі і за величиною рН. У постійно перещеплюваної суспензії умови скрізь однакові, як в навколо-просторі, так і поза ним. Є докази, що рН середовища може бути неоднаковий для різних клітин. Для максимального розмноження цілого ряду перевіваемих клітин оптимальний рН середовища виявився індивідуальним.
При культивуванні експлантатов тканин ссавців початковий рН живильного середовища встановлюють, як правило, на більш високому рівні (7,2 - 7,8), ніж у випадку приготування одношарових клітинних культур. Це пов'язано з високим співвідношенням тканини і живильного середовища і різким зниженням рН в першу добу культивування експлантатов.
Рівень рН середовища при первинній експлантаціі встановлюють з урахуванням концентрації клітин, активності їх метаболізму, складу живильного середовища і умов аерації [14].
Газовая середу . Багато дослідників відзначали важливе значення газового середовища при культивуванні клітин і тканин. Виявилося, що кисень необхідний для збереження життєздатності клітин і особливо для їх розмноження.
Інтенсивність дихання (споживання кліткою кисню в одиницю часу при певній температурі і тиску) залежить від виду, віку тварин і виду тканини.
В основі вікових відмінностей у споживанні кисню лежать особливості метаболізму ембріональних та дорослих тканин. Тканини ембріонів на відміну від тканин дорослих тварин характеризуються переважанням гліколізу. Тому насичення живильного середовища киснем при культивуванні тканин дорослих тварин є більш критичним фактором, ніж при культивуванні ембріональних тканин.
Споживання кисню різними тканинами неоднаково.
У процесі культивування клітин курячих ембріонів ефект Пастера послаблюється.
Споживання кисню тканинними експлантатов різних видів тварин назад пропорційно вазі їх тіла [6].
Враховуючи важливе значення дихання для багатьох культур тканин, було приділено увагу найбільш ефективному насиченню живильного середовища киснем. Зв'язок між напругою кисню в середовищі і диханням клітин становить значний інтерес, так як кисень повинен надходити в розчиненому стані.
Висока концентрація кисню (80 - 95%) придушувала, а низька (0,01%) стимулювала синтез ДНК в одношарової культурі клітин курячого ембріона. Зважаючи слабкою дифузії кисню в клітини для культур тканин і органів потрібно значно більше насичення киснем і рекомендовано застосовувати карбоген (5% СО 2 + О 2).
У більшості поживних середовищ СО 2 виконує функцію буфера, забезпечуючи стабілізацію рН. Крім цього, наявність СО 2 в газовому середовищі покращувало переживання тканинних експлантатов.
Мається повідомлення, що СО 2 необхідний для диференціації тканин і грає роль у фізіологічній регуляції розмноження клітин. Вважають, що при розмноженні клітин поза організмом основна функція СО 2 полягає в забезпеченні синтезу попередників пурину, піримідину, щавелевоуксусной кислоти. Необхідна кількість СО 2 продукується самими клітинами. Тому в закритих посудинах при достатній густоті посіву клітини не потребують припливу СО 2, тоді як при вирощуванні їх у відкритих посудинах його може н...
