алежить від концентрації розчину, чим більше концентрація, тим більше оптична щільність розчину.
Приклад спектра наведений на малюнку 1.3.
Малюнок 1.3 - Залежність коефіцієнта проходження від довжини хвилі
Визначення оптичної щільності проводять на фотоелектричних спектрофотометрах.
Спосіб спектрофотометричного кількісного визначення тритерпенових сапонінів в рослинній сировині та лікарських препаратах заснований здатності сапонінів при нагріванні давати забарвлені продукти з кислотними реагентами. Наприклад, при визначенні суми сапонінів каштана кінського, використовують кобальту хлорид з кислотою сірчаної концентрованої, далі визначають оптичну щільність отриманого розчину і розраховують вміст сапонінів в перерахунку на есцин.
Аналогічними методами кількісного визначення сапонінів є:
· високоефективна рідинна хроматографія з УФ-спектрофотометричним детектуванням. Це один з ефективних методів розділення lt; # justify gt; · високоефективна тонкошарова хроматографія з використанням скануючої фотоденсітометріі. Кількісний аналіз в тонкошарової хроматографії має декілька видів, що характеризує кожен етап розвитку методу. І хоча деякі методи можна застосовувати тільки як напівкількісні, вони досі застосовуються на практиці.
Фотодесінтометріческій метод може бути використаний без виділення речовини з платівки і заснований на визначенні не тільки площі плями, але і його інтенсивності. Це найбільш точний метод визначення концентрації речовин, оскільки дозволяє при використанні калібрувальних графіків, проводити досить точні кількісні визначення всіх розділених речовин (до 2-10%) безпосередньо на платівці за короткий проміжок часу.
В якості стандартів використовують суму аралозидов, виділених з таблеток Сапарал та суму сапонінів цукрових буряків, виділених з щойно зібраного кореневищ. Для нанесення на пластину готують водно-спиртові (80% по етанолу) розчини сапонінів з вмістом останніх 0,4 - 2,0 мг/мл. Хроматографування проводять з використанням пластин для ТШХ Силуфол (Чехія) 15 х 15 см, Армсорб для ВЕТСХ (Вірменія) 6 х 10 см і Сорбфіл (Росія) 10 х 10см. Висота підйому фронту, достатня для повного поділу, становить 10,6 і 6 см, відповідно. Проби наносять за допомогою микрошприца МШ - 10 (Росія) на пластину, підігріту до 40" С. Оптимальний обсяг наносимой проби - 3-5 мкл. Нанесення проводять у кілька прийомів так, щоб діаметр стартового плями не перевищував 2 мм. Межа виявлення сапонінів становить 5 мкг в пробі при прояві фосфорновольфрамовой кислотою і 0,5 мкг в пробі при прояві фосфорномолібденовой кислотою. Обробка парами аміаку дозволяє знизити межу виявлення сапонінів в останньому випадку до 0,2 мкг в пробі.
Ці методи мають високу чутливість і точністю, проте обраний для даного дослідження спосіб спектрофотометрії є найбільш доступним, економічним, експресним, полегшує аналіз і зменшує вартість його проведення.
1.2 Засоби контролю і допоміжні пристрої
Загальні вимоги до компетентності випробувальних та калібрувальних лабораторій наведені в даній роботі відповідно до джерела [3].
Всі використовувані для аналізу реактиви повинні бути хімічно чистими (х. ч.) і (або) чистими для аналізу (ч. д. а).
Вода для приготування розчинів або використовувана в процедурах, повинна бути дистильована 2-го ступеня чистоти або еквівалентна їй за якістю.
Застосовувана апаратура, посуд, реактиви та допоміжні засоби:
- спектрофотометр SPECORD® PLUS lt; # justify gt; - ваги лабораторні CAS amp; CENTRU 2-го класу точності з найбільшою межею зважувань 210 г за ГОСТ 24104;
стакан місткістю 50 см 3 з хімічно стійкого скла ГОСТ 1770;
паперові фільтри по ГОСТ 12026-76;
- колби мірні наливні 2-го класу точності місткістю 25, 50 см 3 (мл) за ГОСТ 1770;
делительная воронка місткістю 150 см 3 по ГОСТ 25336-82;
- порцелянова чашка випарна по ГОСТ 9147-80;
пробірка зі шліфом місткістю 25 см 3 ГОСТ 8682-93;
- кювету прямокутна для спектрофотометрів 10 мм ГОСТ 20903-75 (кварцова);
- вода дистильована за ГОСТ 6709-72 lt; # justify gt; - спирт етиловий (70% об/об) за ГОСТ 18300-87;
- 0, 1 М розчин хлористоводневої кислоти ГОСТ 25794.1-83 lt; # justify gt; - оцтова льодяна кислота по ГОСТ 61, х. ч.;
розчин хлориду кобальту 2 г/л Р по ГОСТ 4525-77;
- сірчана кислота Р ГОСТ 4204-77 lt; # justify gt; 1.3 Порядок підготовки до проведення аналізу
. 3.1 Підгот...
