став) між собою, водневих зв'язків. Класичний приклад вторинної структури ДНК - подвійна спіраль ДНК. Подвійна спіраль ДНК - сама поширена в природі форма ДНК, що складається з двох полінуклеотидних ланцюгів ДНК. Побудова кожної нового ланцюга ДНК здійснюється за принципом комплементарності, тобто кожному азотисті основи одного ланцюга ДНК відповідає строго певне підставу інший ланцюга: в комплементарної парі навпроти A варто T, а навпаки G розташовується C і т.д.
Синтез ДНК. Реплікація
Унікальним властивістю ДНК є її здатність подвоюватися (реплицироваться). У природі реплікація ДНК відбувається наступним чином: за допомогою спеціальних ферментів (Гірази), які служать каталізатором (речовинами, які прискорюють реакцію), в клітині відбувається розплітання спіралі в тому її ділянці, де повинна відбуватися реплікація (подвоєння ДНК). Далі водневі зв'язки, які пов'язують нитки, розриваються і нитки розходяться.
У побудові нового ланцюга активним "будівельником" виступає спеціальний фермент - ДНК-полімераза. Для подвоєння ДНК необхідний також стратового блок або "Фундамент", в якості якого виступає невеликий дволанцюжкові фрагмент ДНК. Цей стартовий блок, а точніше - комплементарний ділянку ланцюга батьківського ДНК - взаємодіє з праймером - одноланцюговим фрагментом з 20-30 нуклеотидів. Відбувається реплікація або клонування ДНК одночасно на обох нитках. З однієї молекули ДНК утворюються дві молекули ДНК, в яких одна нитку від материнської молекули ДНК, а друга, дочірня, знову синтезована.
Таким чином, процес реплікації ДНК (удваивания) включає в себе три основних етапи:
-Розплітання спіралі ДНК і розбіжність ниток
-Приєднання праймерів
-Освіта нового ланцюга ДНК дочірньої нитки
У основі аналізу методом ПЛР лежить принцип реплікації ДНК - синтезу ДНК, який сучасним ученим вдалося відтворити штучно: у лабораторії лікарі викликають подвоєння ДНК, але тільки не всього ланцюга ДНК, а її невеликого фрагмента.
Основний принцип ПЛР
Будь-який метод ДНК-діагностики заснований на специфічної гібридизації двох ниток ДНК, комплементарних (структурно доповнюють) одна іншій. Примірної (хоча і дуже приблизною) аналогією може служити серологічна реакція, заснована на специфічній реакції білка-антитіла з відповідним антигеном. Специфічність зв'язування ниток в спіралі ДНК заснована на зв'язках А-Т і Г-Ц. Праймери комплементарні шуканим ділянкам ДНК, і тому вони здатні зв'язуватися з конкретними ділянками гена. Добудова ниток ДНК, починаючи з доданих праймерів, вимагає наявності в реакційної суміші пурин-і пірімідінтріфосфатов (АТФ, ТТФ, ГТФ і ЦТФ), а також присутності ДНК-полімерази, яка з'єднує їх в ланцюжок згідно послідовності другої нитки ДНК.
Здійснення рутинних методик ПЛР
Досліджуваним матеріалом для ПЛР можуть служити зскрібки епітеліальних клітин, кров, плазма, сироватка, плевральна і спинн...
