їдних клітини. По-друге, визначити частку клітин, що у S-фазі (SPF), і оцінити ступінь проліферації. Як правило, в клітинної популяції з високою проліферативною активністю число клітин в S-фазі більше, ніж зазвичай.
Міжнародний комітет з аналітичної цитометрії (W.Hoddeman, J.Schumann, M.Andreeff, B.Barlogie, CJHerman, RCLief et.al, 1984) спробував стандартизувати безліч способів аналізу ДНК-гістограм, і проте для аналізу продовжують використовувати різні підходи, часто з залученням комп'ютерних прграмм. Далі будуть розглянуті деякі з цих підходів:
В
Обчислення коефіцієнта варіації (CV)
Найпростіший спосіб оцінки якості результатів заснований на обчисленні CV для G1-піку ДНК диплоїдних клітин. Ця величина визначається з наведеного нижче співвідношення в припущенні, що G1-пік слід нормальному розподілу:
CV = W/(M В· 2,35),
Де W - ширина піка на рівні піввисоті, М - номер каналу для максимуму G 1 - піку. p> Чим менше CV і чим краще G 1 -пік відповідає нормальному розподілу, тим якісніше результати. У дійсності якість ДНК-гістограм, як правило, не дуже високо, і щоб судити про достовірність результатів, отриманих при клінічних дослідженнях, доводиться оцінювати середній CV і діапазон його значень.
В
Обчислення індексу ДНК
Індекс ДНК для В«анеуплоїднихВ» піку (піків) на гистограммах з двома або більш G1-піками (рис.1, Б) обчислюють, орієнтуючись на В«диплоїднийВ» G 1 -пік. Так, на рис. 1, Б G 1 -піку для пухлинних клітин відповідає вдвічі більшу кількість ДНК, ніж G 1 -піку диплоїдних клітин, тому індекс ДНК для нього дорівнює 2,0. Для анеуплоїдних клітин, що містять на 50% більше ДНК, ніж нормальні, індекс дорівнює 1,5. Анеуплоїдія можна виявити тільки в тих випадках, коли на гистограммах є не менше двох G 1 -піків. Щоб встановити, який з близько розташованих один до одного G 1 -піків відповідає диплоїдним клітинам зі свіжих зразків тканини, можна використовувати зовнішній ДНК-стандарт. Якщо присутні тільки диплоїдні клітини, то ІД вважають рівним 1,0.
Основна проблема при визначенні плоїдності пов'язана з трудністю виявлення малого числа анеуплоїдних стовбурових клітин. Ще важче ідентифікувати нечисленні тетраплоїдні стовбурові клітини, оскільки такі клітини в G 1 -фазі за вмістом ДНК рівноцінні диплоїдним клітинам у фазі G 2. Так, на відміну від рис 1, Б, на якому чітко видно високий В«тетраплоиднийВ» пік, на рис.1, А виявляється лише слабкий пік, відповідний чотирьом гаплоїдний наборам ДНК. <В В
Визначення частки клітин, що у S-фазі
Для визначення частки клітин в S-фазі використовується метод Байсха та ін (H.Baisch, W.Gohde, WALinden, 1975), модифікований стосовно анеуплоїдних клітинам. Суть методу полягає в побудові прямокутника, вписується в простір між G 1 - ...
