и її знову до насоса і прокачати колонку 2-3 години вхолосту для остаточної В«укладанняВ» гранул в колонці. Після чого можна приступати до її завантаженні препаратом і фракціонування.
Коротку колонку (менше 20 см) можна наповнити гранулами на 3/4 її висоти і без допомоги подовжувальної трубки. Приготувати кілька більш густу кашку гранул (1,15:1), залити її прямо в колоночку і відразу почати прокачування робочої рідини зі швидкістю, наміченої для проведення експерименту, протягом години. За цей час гранули осядуть до свого робочого рівня.
Резервуари для елюенту
Якщо немає можливості скористатися насосом (і гранули у колонці не надто дрібні - рідина може протікати через неї В«самопливомВ») то для підтримки постійної швидкості течії рідини через колонку можна скористатися простим пристроєм, що має назву В«Колбою МаріоттаВ». Пробка, через яку проходять дві трубочки повинна щільно закривати колбу з робочою рідиною (В«елюентомВ»). У цьому випадку швидкість закінчення елюенту з колби не змінюватиметься, - незважаючи на зниження рівня рідини в ній, - до тих пір, поки цей рівень не опуститься до нижнього кінця допоміжної трубочки, по якій повітря потрапляє у простір над рівнем рідини в колбі. Справа в тому, що аж до цього моменту сума тисків повітря під пробкою і стовпа рідини над нижнім кінцем допоміжної трубочки залишається незмінною - рівною атмосферному тиску. Відрегулювати швидкість протікання рідини через колонку можна становищем кінця петлі, приєднаної до її виходу, як це показано на рис. 2 б. br/>В
Рис. 2
Швидкість протікання рідини через колонку (В«швидкість елюціїВ») визначатиметься гідравлічним напором - різницею рівнів В«НВ».
Як буде видно з подальшого, при хроматографічному поділі речовин в більшості випадків використовують градієнтну елюція колонок з лінійним (або нелінійним) зміною змісту активного компонента в елююють рідини. Ці градієнти утворюються точно таким же чином (комбінацією змішувач - резервуар), як це було описано для створення градієнта концентрації сахарози при ультрацентріфугірованіі.
д) Внесення препарату на колонку
Вихідний препарат в більшості випадків вносять до хрому-графічною колонку розчиненим у тому ж буфері, яким В«урівноваженаВ» сама колонка. Треба простежити за тим, щоб розчин препарату був прозорий, вільний від частинок або пилу. При необхідності його слід В«освітлитиВ» центрифугуванням або відфільтрувати.
У відкриту колонку препарат вносять вручну, з піпетки. Починають з того, що спускають рідину з колонки так, щоб відкрився, але не почав обсихати верхній шар гранул. Зливну трубку затискають. Розчин препарату обережно, щоб не взмутіть гранули, заливають з піпетки по стінці колонки, починаючи від відстані в 1 мм над поверхнею гранул і поступово, разом з рівнем препарату, просуваючи кінчик піпетки вгору по стінці. Після того, як весь обсяг препарату внесений в колонку, зливну трубочку звільняють від з...
