атиску і дають шару препарату увійти повністю у верхній шар гранул. Таким же чином вносять обсяг елюенту, що дорівнює об'єму препарату, а потім запускають і його в гранули. Таку промивку стінок колонки доцільно повторити ще раз. Нарешті заливають ще елюент на висоту 1-2 см і вставляють верхню пробку з крапельницею. Шар вільного елюенту над гранулами потрібен для того, щоб запобігти оголення верхньої поверхні шару гранул при непрацюючому насосі і відкритому зливі з колонки. (У перший момент після відкриття зливу деяку кількість рідини повинна вилитися, щоб під верхнім ковпачком колонки утворилося розрідження, прекращающее подальший злив рідини.)
Разом з тим, слід мати на увазі, що у разі градієнтної елюції у вільному шарі елюенту над гранулами відбувається перемішування градієнта. Тому в цьому випадку висота вільного шару рідини над гранулами повинна бути мінімально необхідною. Після того, як внесення препарату і підготовка колонки закінчені, можна почати процес елюції, відкривши зливну трубку і включивши насос.
У фірмових колонок всі описані операції спрощуються завдяки наявності спеціального В«адаптераВ». Спосіб його використання наводиться в технічному описі колонки.
Варто згадати ще про одну В«ДрібниціВ». Вкрай небажано попадання в будь-яку ділянку рідинного тракту, обслуговуючого хроматографическую колонку, бульбашок повітря. Тому з'єднання будь-яких двох поліетиленових трубочок цього тракту (зазвичай через перехідник із силіконової гуми) слід виробляти так, щоб перехідник на нижньої трубочці був заповнений з виступаючим меніском, а на кінці верхньої трубочки висіла крапелька (або навіть текла рідина). Крапелька зливається з меніском і в цьому вільному від повітря "оточенні" верхня трубочка вставляється в перехідник.
Перистальтичний насос
Перістальтичні насоси можуть створювати тиск на вході в колонку до 5 атмосфер і в дуже широкому діапазоні варіювати швидкість подачі рідини: від сотих часток мілілітра до тисяч мілілітрів на годину. Головна їхня відмінність ще в тому, що нагнітається рідина в насосі не контактує ні з чим, крім трубочки із силіконової гуми, всередині якій вона знаходиться. Крім того перистальтичні насоси забезпечують мінімум пульсації і можливість плавного регулювання швидкості подачі рідини. На рис. 3а зображена схема робочої частини перистальтичного насоса роликового типу.
В
Рис. 3
6 роликів вільно сидять на своїх осях розташовані по периферії плоского, обертового диска. Регульована гвинтом платівка в будь-який момент часу притискає вельми еластичну гумову трубку до трьом нижнім роликам так, що рідина усередині трубки видавлюється з-під роликів і збирається в двох здуттях між ними. Ролики прокочуються по трубці. У наступний момент часу правий ролик відійде вгору і звільнить вихід рідини з правого здуття назовні, до колонки. Цю рідину буде видавлювати середній ролик, що котиться вправо. Лівий ролик, ...
