озчинених у водному середовищі. При визначенні ферментів біологічну рідину використовують для дослідження цілком, не піддаючи будь-якій обробці. Лише при високій концентрації ферменту в середовищах їх перед визначенням розводять. У той же час присутність ферментів часто заважає визначенню в біологічних рідинах тих речовин, перетворення яких вони каталізують. Тому отриманий матеріал відразу обробляють реактивом, який припиняє дію ферментів, і облягають як ферментні, так і будь-які інші білки. Для осадження використовують трихлоруксусную, хлорне, азотну, фосфорно-вольфрамову, сірчану та інші кислоти, гідроксид барію з сульфатом цинку або просто термічну обробку біологічного матеріалу. p align="justify"> При біохімічному дослідженні клітин, тканин і органів прийоми їх обробки ускладнюються, оскільки досліджуваний компонент може бути локалізований в якому-небудь органоидам або навіть його частини, наприклад, в мембрані. Тому спочатку клітини або тканину піддають руйнуванню різними способами. Найчастіше застосовують механічне руйнування тканини за допомогою гомогенізатора. Він являє собою скляний стакан, форма якого і розміри можуть бути різні. У цей стакан поміщають шматочок тканини, подрібнений ножицями, і відповідну рідку середу (зазвичай розчин сахарози, хлориду калію), що дозволяє зберегти наінтактною виділяються структурних утворень клітини. p align="justify"> Розтирання тканини здійснюється при русі вгору і вниз обертового в склянці гомогенізатора маточки, який з'єднаний через привід з віссю електромоторчіком. На час гомогенізації склянку гомогенізатора поміщають в лід, щоб уникнути нагрівання і пошкодження субклітинних структур. p align="justify"> У простому випадку гомогенат отримують, розтираючи тканина з товченим склом або кварцовим піском у фарфоровій ступці.
Можливо також руйнування тканини і клітин високочастотними ультразвуковими коливаннями і за допомогою В«осмотичного шокуВ». Останній метод використовують при руйнуванні еритроцитів і інших клітин крові. Він полягає в тому, що при додаванні дистильованої води мембрана клітин розривається від надлишкового внутрішньоклітинного осмотичного тиску. p align="justify"> Гомогенізація тканини і руйнування клітин - стадія обробки, попередня розділенню клітинних компонентів.
2. Основні методи поділу та виділення речовин при біохіміескіх иследований
Гомогенати являють собою складну суміш часток, що відрізняються за розміром, формою і хімічним складом. Для поділу та виділення цих частинок, а також молекул, що містяться в біологічному матеріалі, використовуються різні методи, які підсумовані в табл.1. br/>
Таблиця 1. Основні методи поділу та виділення речовин, що застосовуються при біохімічних дослідженнях (за В.В.Меньшікову, з доповненнями)
Властивість, що використовується для разделеніяМетоди поділу і виделеніяРазлічіе температур перехода1.Перегонка (дистиляція) речовин з одного стану в другое2.Мікродіффузія (ізотермічна дистиляція) 3.Озоленіе4.Випаріваніе (висушування) 5.ЛіофілізаціяРазлічіе розчинності веществ6.Екстракція7 . Протиточний распределеніе8.Фракціонное осадження (за видами обложників агентів і засобів): 8.1.Нейтральнимі солями (висолювання) 8.2.Кислотами8.3.Гидрофильными органічними растворителями8.4.Водорастворимыми недіссоціірующімі високомолекулярними полімерамі8.5.Тяжелимі металами та їх гидроксидами8.6.Органическими катіонамі8.7.Аніонамі і полианионами8.8.ИммунопреципитациейРазличие швидкості седиментации9.Седиментационный в розмірах молекул10.Діаліз: 10.1.Прі рівному давленіі10.2.Прі підвищеному давленіі10.3.Прі зниженому тиску (ультрафільтрація) 10.4.ЕлектродіалізРазлічіе розподілу між рухомою і нерухомою фазами, засноване на неоднаковою розчинності, сорбіруємості, 11.Хроматографія (з техніки здійснення підрозділяється на колоночную, тонкошарову і паперову): на різниці в значеннях електричного заряду, в розмірах молекул11.1.Адсорбціонная (рідинно-адсорбційна, іонообмінна, газо-адсорбційна) 11.2.Распределітельная (рідинно-рідинна, газо-рідинна) 11.3.Гель- хроматографія і гель-фільтрація11.4.Аффінная (біоспецифічного) хроматографіяРазлічіе в електричному заряді молекул12.Електрофорез: 12.1.Свободний12.2.На носіях: а) на папері (простий і високовольтний) б) на гелях (агар, агароза, крохмаль, поліакриламід ) в) на плівці (ацетилцелюлозу) 13.Комбінірованний електрофорез: 13.1.Електрофорез + іммунодіффузія (імуноелектрофорез) 13.2.Електрофорез + хроматографія (техніка В«відбитків пальцівВ») Різниця в електричному заряді молекул при певному рН14.Ізоелектріческое фокусування в градієнті рН: 14.1. Свободное14.2.Зональное14.3.В геле14.4.Иммуноэлектрофокусирование
3. Основні прилади, що використовуються в практикумі
При проведенні біохімічних досліджень використовуються різні прилади та обладнання, що дозволяють виділити досліджуване речо...
