, вплив досліджуваного препарату на масу органів у кастрованих щурів обох статей, морфологічні методи дослідження органів при впливі VH на самців і самок щурів, вплив VH на розвиток ембріонів птахів і викльов пуголовків з ікри жаби при дії пептиду на їх запліднену ікру, регуляцію функції меланоцитів шкіри жаб, дія їх на макрофаги печінки дорослих щурів при хронічному досліді та інші досліди будуть розглянуті окремо.
2.3 Біологічний метод дослідження короткого пептиду КНСС людини
Відомо, що біологічна активність і концентрація гормонів прямо пропорційні його кількістю (Бакл Дж., 1986). Біологічну активність короткого пептиду КНСС людини визначають перед проведенням кожної серії дослідів не менше ніж на двох знерухомлених і розкритих дорослих самцях жаб, яких фіксують до пробкою платівці я положенні на спині. Їх серце оголюють, розкривши епікардом, і підраховують вихідну частоту серцевих скорочень (ЧСС). Потім на серце кожної жаби наносять по одній краплі коротко пептиду КНСС людини, титруемого в 0,9% -ном розчині хлориду натрію, починаючи з титру розчину 1:16. При цьому титр пептиду КНСС людини поступово зменшують (1 8; 1 * 4j I 1 2), попередньо відмивши серце 0,9% -ним розчином хлориду натрію, відзначаючи кожен раз зростання ЧСС протягом 1 хвилини і порівнюючи з вихідною кількістю серцебитті у кожної з жаб. Титр пептиду КПРС людини, якому відповідає збільшення числа ЧСС на 10,0 ± 2,7% від вихідного, за даними BC Бахтіновой (1986), відповідає концентрації пептиду КПРС людини, рівної 0,5 мкг/мл білка, що було доведено нею за методом Lowry (1951). [6]
Ліофільно висушений препарат в укупореннойтарі, наприклад. в запаяній ампулі, добре зберігається в холодильнику при ~ 5-8 ° С протягом 12-36 місяців. У розчині з додавання 0,02% мертіолату натрію в закупореній посуді в холодильнику при 5-8 ° С він не втрачає своєї активності до 4-6 місяців. У парах тимолу без консервантів розчин препарату в холодильнику при 5-8 ° С також зберігає актівность до 1,5-2 місяців.
Наукові факти, отримані зарубіжними вченими (Onstott D. і Elde R.) при Імунофлуоресцентна методах визначення U II відзначили, що поряд зі специфічним світінням у ряді нефроцитів. свідчить про наявність в них UII, визначалися профілі темних нейронів, що могло вказувати на секрецію ними іншого гормону - уротензіна I.
Наші подібні дослідження, проведені в 1978 році на се-зах спинного мозку людини, бика, кролика, щурів методом непрямої флуоресценції зі специфічною кролячій сироваткою проти UII (VH), свідчили про специфічний світінні в частині мотонейронів, сусідять із абсолютно темними нейронами. Поряд з цим, специфічне світіння малося на наших препаратах по ходу кровоносних судин і всередині них, що свідчило двох фактах: Не всі мотонейрони секретують короткий пептид. Даний пептид транспортується по кровоносних судинах.
Глава 3. Вплив короткого пептиду КНСС людини на системи органів
. 1 Вплив короткого пептиду КНСС на статеву і репродуктивну систему щурів
Гістологічні дослідження та вивчення маси внутрішніх статевих органів щурів, що беруть участь при дослідженні хронічної токсичності короткого пептиду КНСС людини свідчать про значні структурних їх змінах і зниженні маси порівняно з контрольними тваринами. [3]
Матка експериментальних щурів за масою в порівнянні з контролем зменшена на 37,0 ± 2,1% (р lt; 0,002), а яєчники - на 23,0 ± 1,7% (р lt; 0,001). Мікроскопічні дослідження цих органів також показують їх відмінність від контролю. Діаметр матки зменшений на 28,75% за рахунок зниження товщини міометрія (міометрій тоншим на 34,57% у порівнянні з контролем) і ендометрія (ендометрій у цих самок тонше на 22,5%). У ендометрії експериментальних самок діаметр маткових залоз на 28,73% менше, ніж у контрольних. Значно зменшені розгалуження залоз ендометрію. Вистелений він кубічнимепітелієм. Секрет в залозах відсутня. У яєчнику експериментальних щурів є маса незрілих зростаючих фолікулів, що визначаються у два рази більше, порівняно з контролем, маса атретіческіх і білих тел. Жовті тіла знаходяться на стадії проліферації і васкуляризації. Зрілих фолікулів і жовтих тіл немає. Прімордіальних фолікулів в яєчнику експериментальних самок в 2,6 рази більше, ніж у контрольних. У експериментальних самців маса передміхурової залози Зменшено в 1,35 рази, діаметр розгалуження її залоз помітно знижений. Зменшено діаметр ядер секреторного епітелію.
Таблиця 1
Морфологічні зміни у внутрішніх статевих органах самок щурів при введенні вазотоніна-Н у дозі 25 мкг/кг щодня протягом 40 днів на прикладі матки
Група жівотнихВнешній діаметр, мкмТолщіна міометрія, мкмТолщіна ендометрію, мкмДіам...
