lign="justify"> 1.2 Методи отримання цільового продукту
Граміцидин С вперше виділений в СРСР в 1944 р групою Гаузе і Бражникова нз штаму Baсillus brevis. У 1946 р Сінг зі співробітниками встановили його первинну структуру lt; # 212 src= doc_zip1.jpg / gt;
Третій шлях синтезу lt; # 692 src= doc_zip2.jpg / gt;
мікроорганізми виробляють граміцидин С є бактерії роду Bacillus brevis. Серед них лідируюче місце займає високопродуктивний штам 101.
Існуючий періодичний процес отримання граміцидину С при вирощуванні найбільш продуктивних штамів Bacillus brevis, вибраний як прототип, який використовували для синтезу продукту при вирощуванні Bacillus brevis штаму 101, характеризується тим, що виробляється одноразова завантаження живильне середовище в ферментер, інокуляція посівним матеріалом, культивування при аерації і перемішуванні протягом 27 годин до досягнення величини рН 6,0 і нижче.
Аналіз цього способу показав, що ферментаційна середу містить весь запас поживних субстратів з моменту посіву. Отже, раніше при культивуванні Bacillus brevis для росту і біосинтезу граміцидину С не використовували підживлення концентратами поживних розчинів оптимізованого складу, як вони використовувалися в. Поживна середу прототипу не оптимальна, оскільки недостатня по окремих елементах живлення (фосфор і магній), і в той же час містить в надлишку інші (гліцерин і щавлевокислий амоній). У результаті високої інгібуючої концентрації гліцерину і амінного азоту (2,0-3,0 г/л) в середовищі зростання продуцента уповільнений. Внаслідок нестачі мінеральних компонентів концентрація біомаси становила всього близько 10 г/л в середньому і не більше 15 г/л. Висока концентрація молочної кислоти (10,5 г/л) сприяє накопиченню клонів, що не продукують граміцидин С. При вирощуванні продуцента на цьому середовищі величину рН Не регулювали, і вона знижувалася до значень нижче 6,0. Низька швидкість массопередачи по кисню (1,28 · 10 - 2 г О2/л · хв) при аерації 0,66 л/л · хв і перемішуванні (259-303 об/хв) також не сприяла отриманню культури з високою концентрацією біомаси та продукту. З цієї причини вміст граміцидину в культурі в кращому випадку становило близько 2 г/л. Цей метод був вкрай неефективним, і його усовершенствоваллі, таким чином, що вдалося отримати більше 3 г/л граміцидину с. З метою збільшення виходу граміцидину С при глибинному вирощуванні продуцента Bacillus brevis на синтетичному середовищі ви?? ащіваніе виробляють на середовищі наступного складу:
- гліцерин - 20 мл/л,
харчова 40% молочна кислота - 2-4 мл/л;
автолізат дріжджів - 0,1 г/л (по амінного азоту);
гідролізат казеїну - 0,2 г/л (по амінного азоту);
хлористий амоній, NH4Cl - 0-3,4 г/л;
двозаміщений фосфорнокислий амоній, (NH4) 2HPO4 (ДАФ) - 0,85-4,5 г/л;
калій фосфорнокісний однозаміщений, KH2PO4 - 0-1,0 г/л;
магній сірчанокислий, 7-водний, MgSO4 · 7H2O - 0,9 г/л;
натрій лимоннокислий, одноводного - 1,0 г/л.
Зміст в середовищі аминного (відновленого) азоту - 1,3-1,6 г/л.
Спосіб включає додаткове підживлення концентрованим живильним розчином, до складу якого входять гліцерин, харчова 40% -ва молочна кислота, хлористий і двозаміщений фосфорнокислий амоній і сірчанокислий магній при співвідношенні концентрацій гліцерину, молочної кислоти, азоту, фосфору і магнію 1: (0,008-0,032) :( 0,027-0,036) :( 0-0,008) :( 0,002-0,008), введення якого виробляють при значеннях амінного азоту в культуральній рідині нижче 1,4 г/л до досягнення концентрації не більше 1 , 75 г/л при обмеженні зростання нестачею кисню в умовах плавного підвищення інтенсивності перемішування за показниками швидкості массопередачи кисню з 0,25 · 10-3 до 1,0 · 10 - 3 моль O2/л · хв і швидкості перемішування з 200 до 500 об/хв і підтримки парціального вмісту розчиненого кисню в культурі, близького до нуля (0-10%), підтримки значення рН на рівні 6,5-6,8 і при зупинці процесу вирощування через 2-6 ч після початку стаціонарної фази, про що свідчить зміна концентрації біомаси (приріст або убуток) по оптичній щільності, на величину не більше ніж на 1 г/л.
1.3 Характеристика продуцента
brevis - грампозитивні, анаеробні, спороутворюючі бацили зазвичай зустрічаються в грунті, повітрі, воді, і в місцях розкладання органічних речовин. Це рідко, пов'язано з інфекційними захворюваннями. Антибіотики груп граміцидини і Тироцидин вперше були виділені їх цих бактерій. brevis являють собою грампозитивні палички, t оптимального зростання є 35-55 ° C. Це рухливі спороутворюючі палички які володіють позитивною активність на каталазу і желатин, але негативний на амілазу, казеїн і індол. Більшість з них викори...
