Фронт рухомої фази: не менше 10 см від лінії старту.
Висушування: при температурі від 100 ° С до 105 ° С. Прояв: теплу пластинку обприскують розчином 10 г/л діфенілборной кислоти аміноетілового ефіру Р в метанолі Р і потім розчином 50 г/л макрогола 400 Р в метанолі Р. Через 30 хв пластинку переглядають в ультрафіолетовому світлі при довжині хвилі 365 нм.
Верх хроматографічної ячейкіСілібінін: флуоресціююча зона жовтувато-зеленого цветаФлуоресцірующая зона желтоватозеленого кольору (силибинин) Таксіфолін: флуоресціююча зона оранжевого цветаФлуоресцірующая зона оранжевого кольору (Таксіфолін) флуоресціюючих зона желтоватозеленого кольору (силікристин) флуоресціюючих зона блакитного кольору (лінія старту ) Розчин сравненіяІспитуемий розчин Рисунок2. Хроматографічна осередок
На хроматограмі випробуваного розчину можуть виявлятися інші флуоресціюючі зони оранжевого і жовтувато-зеленого кольору між зонами силібініну і Таксіфолін. [5]
7. Методи контролю якості ЛРС. Кількісні показники
7.1 Визначення змісту силімарину у перерахуванні на силибинин. Рідинна хроматографія
Випробуваний розчин. 5,00 г подрібненої сировини (500) (2.9.12) поміщають в апарат для екстракції, додають 100 мл петролейного ефіру Р і нагрівають у водяній бані протягом 8 ч. Знежирений залишок сировини охолоджують до кімнатної температури і поміщають в апарат для екстракції і екстрагують 100 мл метанолу Р в водяній бані протягом 5 ч. метанольна екстракт упарюють у вакуумі до об'єму близько 30 мл, фільтрують у мірну колбу місткістю 50 мл, обполіскуючи апарат для екстракції і фільтр метанолом Р, і доводять до обсягу 50,0 мл цим ж розчинником. Розчин порівняння. Наважку ФСО сухого екстракту розторопші стандартизованого, відповідну 5,0 мг силібініну (m1, г), розчиняють у метанолі Р і доводять до обсягу 50,0 мл цим же розчинником.
Умови хр?? матографірованія:
колонка довжиною 0,125 м і внутрішнім діаметром 4 мм, заповнена силікагелем октадецілсілільним для хроматографії Р з розміром частинок 5 мкм;
рухома фаза. Рухома фаза А: кислота фосфорна Р - метанол Р - вода Р (0,5: 35: 65, об/об/об); Рухома фаза В: кислота фосфорна Р - метанол Р - вода Р (0,5: 50: 50, об/об/об);
швидкість рухомої фази: 0,8 мл/хв;
спектрофотометрический детектор, довжина хвилі 288 нм;
обсяг введеної проби: 10 мкл.
Час утримування: силибинин В - близько 30 хв; при необхідності змінюють тимчасову програму градієнта.
Ідентифікація піків: ідентифікують піки силикристина, силидианина, силібініну А, силібініну В, ізосілібініна А і ізосілібініна В, використовуючи хроматограму прикладену до ФСО сухого екстракту розторопші стандартизованого. На хроматограмі випробуваного розчину пік силидианина може мати різну величину, може бути відсутнім або бути основним піком. Придатність хроматографічної системи: розчин порівняння:
дозвіл: не менше 1,8 між піками силібініну А і силібініну В;
хроматограмма повинна відповідати хроматограмме, що додається до ФСО сухого екстракту розторопші стандартизованого. Визначають площі піків, відповідних силикристина, силидианина, силібініном А, силібініном В, ізосілібініну А і ізосілібініну В.
Зміст силімарину у перерахуванні на силибинин у відсотках розраховують за формулою
(A1 + A2 + A3 + A4 + A5 + A6) m1 P 1000/(A7 + A8) m2 (100-W)
де: A1, A2, A3, A4, A5, A6 - площі піків відповідних силикристина, силидианина, силібініном А, силібініном В, ізосілібініну А і ізосілібініну У відповідно на хроматограмі випробуваного розчину;
A7, A8 - площі піків відповідних силібініном А і силібініном У відповідно на хроматограмі розчину порівняння; - маса наважки ФСО сухого екстракту розторопші стандартизованого, взятого для приготування розчину порівняння, г; - маса наважки випробуваного сировини, г ; - сумарний вміст силібініну А і силібініну В в ФСТ сухого екстракту розторопші стандартизованого,% .- втрата в масі при висушуванні випробуваного сировини,%. [5]
7.2 Пряма спектрофотометрія. Визначення суми флаволігнанів в перерахунку на силибинин
Пряма спектрофотометрія - 288+ - 2 нм (максимум в поглинанні).
Найкращий розчинник - 96% спирт (так як при більш низьких концентраціях в екстрактах з'являється каламуть у зв'язку з нерозчинністю флаволігнанів у воді), найкраща ступінь измельченности: 0.50 - 0.75 мм (найкращі результати), оптимальний час екстракції- 60 хвилин (4.48% силімарин, оптична щільність -...
