стерильно розкривають, з них засівають продукти і наявний соус. Зразки треба брати в місцях, що викликають сумнів у доброякісності продукту. З середини кожного зразка стерильно вирізують шматочки, роздрібнюють і по 20-25 г засівають в 200-250 мл середовища. Для виявлення ботулинических токсинів в харчовому продукті його беруть на дослідження в підозрілих місцях по органолептичними показниками в кількості 20-25 р. Якщо продукт солоний, його розтирають у стерильній ступці з подвійним об'ємом дистильованої води або фізіологічного розчину і залишають при кімнатній температурі па 2 години для екстрагування токсину, після цього ставлять реакцію.
Виділення мікробів ботулізму з грунту являє значні труднощі. Грунт для дослідження береться на глибині 5 - 10 см в кількість 100-150 г в стерильний посуд, закриту гумовою або притертою пробкою, і зберігається в прохолодному місці. Для навішування грунту одного зразка за 20-25 г роздрібнюють в стерильних ступках з двома об'ємами фізіологічного розчину. Суспензію однієї навішування засівають у флакон або колбу з 200 - 250 мл середовища, НЕ прогріваючи. Іншу наважку в колбі прогрівають на водяній бані при 80 В° у протягом години. Якщо хочуть вбити в грунті суперечки всіх слабостійких до температури бактерій, то суспензію нагрівають при 100 В° протягом 10-20 хв. і після цього засівають на 200-250 мл середовища. З посівів грунту надалі вивчаються тільки те, культуральна рідина яких вбиває мишу в дозі 0,1-0,25 мл, а морську свинку - 2,3-3,0 мл.
Посіви досліджуваного матеріалу вивчають бактеріоскопічно через 2-3 доби і при виявленні підозрілих бактерій ставлять з культуральної рідиною на 2-4 мишах попередню реакцію нейтралізації з полівалентною ботулінічним діагностичної сироваткою. Однією або двом мишам вводять підшкірно 1.0 мл культуральної рідини, змішаної з 1,0 мм полівалентної сироватки, що містить по 100-500 АЕ антитоксина кожного типу. Остаточне висновок про присутність токсинів в посівах робиться на 6-10 добу. Виділення чистої культури виробляють з посіву гріти і нагрітого матеріалу. У перших посівах бактерії в чистій культурі можуть виявитися нетоксігенних. Необхідні багаторазові пересівання їх на різних середовищах для підбору найбільш оптимальної середовища для токсінообразованія. Якщо в посівах мається ботулінічний токсин, в перших генераціях не слід робити повну очистку штаму від супутніх бактерій; це може призвести до втрати токсигенності. Виділення чистої культури типів С, U u Е представляє великі "труднощі. p> Біологічну пробу і реакцію нейтралізації зі специфічними діагностичними сироватками типів А, В, С, D і Е зазвичай ставлять на мишах і морських спинках. Екстракти з досліджуваного матеріалу ділять на 2 частини. Одну з них кип'ятять у водяній бані протягом 20-30 хв. для руйнування токсину. Постановка біологічної проби є орієнтовним дослідженням і зводиться до того, що кожен зразок кип'яченої і накопичений рідини вводять двом мишам внутрішньовенно по 0,5 або підшкірно по 1,0 мл. Двом морським свинкам (вагою по 300-350 г) вводять підшкірно по 2-5 мл рідини - Однієї свинці кип'ячену рідина, а інший - некип'ячену. Якщо в рідині міститься ботулінічний токсин, тварини, що отримали некип'ячену рідина, гинуть, а отримали кип'ячену - залишаються живими.
Висновок про присутність ботулінічного токсину в -якому субстраті можна зробити тільки на підставі реакції нейтралізації. Беруть 6 Пробірок, в кожну наливають по 1,0 мл досліджуваної рідини, потім у пробірки вносять по 1 мл сироватки: у першу - типу А, у другу - В, в третю - З, у четверту - D, у п'яту - Е, в шосту, контрольну пробірку, додають 1 мл фізіологічного розчину. Перед додаванням сироватку розводять фізіологічним розчином до змісту 100-200 АЕ в 1 мл. Після додавання сироватки пробірки злегка струшують, і суміш залишають на 30 - 40 хв. на столі або ставлять у термостат при 37 В° для нейтралізації токсину. Суміш рідини і сироватки кожного тина вводять двом мишам внутрішньовенно по 0,5 мл або по 1 мл підшкірно. За наявності токсину гинуть контрольні миші, що отримали одну рідину. Залишаються живими лише ті миші, які отримали рідина з нейтралізованим токсином, що дозволяє визначити типову його приналежність. Для постановки цієї реакції на морських свинках в кожну пробірку вносять по 4 мл рідини і для нейтралізації токсину по 4 мл сироватки, тваринам вводять підшкірно по 6 мл цієї суміші. Остаточний облік результатів реакції виробляють на виборах 4-5-й день. Видова і типова приналежність нетоксичних чистих штамів бактерій ботулізму може бути орієнтовно визначена за допомогою реакції аглютинації з сироваткою типів А, В, С, D і Е.
