зі спектру виникають певні труднощі внаслідок перекривання резонансних сигналів різних сполук. Але зазвичай один і той же компонент дає сигнал у різних областях, тому майже завжди вдається знайти таку область, в якій один із сигналів досить добре відділений і придатний для інтегрування.
Особлива складність кількісного аналізу біологічних рідин і тканин, які можуть містити сотні компонентів у дуже великому інтервалі концентрацій, в тому, що зазвичай заздалегідь не відомо, до якої глибини необхідно проводити аналіз і яким мінімальним рівнем вмісту компонентів слід обмежитися.
При дослідженні тканин методом ЯМР їх використовують як у нативному, так і в екстрагувати стані. Але відбір біорідин простіше здійснити, тому вони використовуються частіше. p> При аналізі спектрів будь-яких біоматеріалів виникає ряд загальних проблем, вирішення яких вимагає спеціальних методів.
1. Придушення сигналу води
Вода - це основа будь-якої біорідини. Її сигнали завжди інтенсивніше сигналів розчинених речовин. Для заглушення сигналу води можна використовувати ліофілізацію, а потім розчинити осад у D 2 O. Але під час ліофілізації губляться летючі і нестабільні компоненти. Внаслідок цього аналіз втрачає точність. p> Частіше для придушення сигналу води використовують спеціальні імпульсні послідовності. Одна з них - Метод селективного попереднього насичення. - На пробу впливають радіочастотними імпульсами великої тривалості, селективно налаштованими на частоту сигналу води. Розроблено і складніші послідовності. p> 2. Пробопідготовка
До точно фіксованим обсягом біорідини (зазвичай близько 500 мкл) додають отмеренное (близько 10% по об'ємом) кількість розчину зразка порівняння в D 2 O відомої концентрації. Найчастіше в якості такого зразка використовують 3-триметил-[2,2,3,3 - 2 Н 4 ]-пропіонат натрію. p> На основі інтенсивностей по стандартною методикою розраховуються концентрації всіх з'єднань.
Положення сигналів основних компонентів сильно залежить від pH зразка і температури реєстрації Тому, щоб такі вимірювання можна було порівнювати між собою, обидва ці параметра повинні бути строго стандартизовані. У в'язі з цим перед реєстрацією до зразка додають стандартна кількість фосфатного буферного розчину.
Для більшості вимірів використовують частоту ЯМР 500-700 МГц.
3. Методи обробки та інтерпретації спектрів
Спектр ЯМР будь біологічної рідини - це суперпозиція спектрів величезного числа сполук, серед яких лише кілька десятків представляють реальний інтерес, так як тільки їх присутність або зміна і концентрації несе інформацію, важливу з точки зору медичної діагностики.
Повний аналіз займає багато часу, не доцільний, оскільки не виконує основне завдання - швидко виявити аномалію і визначити її природу.
Для аналізу спектрів використовується підхід, заснований на звірці інформації. Спочатку відбирають групу...
