кожної лужної колонки потрібно 5,16 г суміші). Отриманий вологий порошок переносять частинами, приблизно по 2 г, в хроматографическую колонку діаметром 21 мм, нижня частина которойзаполнена набиванням їх бавовняної вати або скловати. Без особливого зусилля ущільнюють суміш після кожного додавання матеріалу, застосовуючи для цього скляну паличку, до утворення однорідного і щільного шару.
Переносять в лужну колонку шар суміші, підготовленої за або. Для виключення втрат кофеїну хімічний стакан двічі очищають порціями діатомової землі по 1 г і також поміщають в лужну колонку. Поверх кладуть шар бавовняної вати або скловати.
Колонка 2 (кислотна) (рисунок Б.1)
Рисунок Б.1 - Колонки для визначення масової частки кофеїну
- колонка 1 (лужна) довжиною 250 мм; 2 - бавовняна вата або скловата; 3 - суміш діатомової землі та аналізованого зразка; 4 - 3 г діатомової землі та 2 см3 NaOH (5,16 г); 5 - бавовняна вата або скловата; 6 - кран, переважно з політетрафторетилену; 7 - колонка 2 (кислотна) довжиною 250 мм; 8 - скловата; 9 - 3 г діатомової землі і 3 см3 H2SO4 (6,36 г)
Ретельно перемішують 3 г діатомової землі з 3 см3раствора сірчаної кислоти до отримання однорідної суміші. (Матеріал длязаполненія колонки може бути підготовлений заздалегідь і зберігатися в закритих ємностях. Для кожної кислотної колонки потрібно 6,36 г суміші). Отриманий вологий порошок переносять частинами, приблизно по 3 г, в хроматографическую колонку діаметром 17 мм, нижня частина якої заповнена набиванням з скловати. Без особливого зусилля ущільнюють суміш після кожного додавання матеріалу, застосовуючи для цього скляну паличку, до утворення однорідного і щільного шару. Поверх кладуть шар скловати.
Очищення і витяг кофеїну
Встановлюють колонки одну над іншою так, щоб рідина з лужної колонки прямо стікала в кислотну колонку. Пропускають поступово 150 см3 діетилового ефіру через обидві колонки.
Кран колонки 2 регулюють так, щоб на поверхні вмісту в колонці залишився тонкий шар рідини. Після цього колонку 1убірают, а через колонку 2 пропускають ще 50 см3 діетилового ефіру. Витікаючу з колонки 2 рідину зливають у відходи. (Використовуваний діетиловий ефір може бути відновлений збовтуванням його з сірчанокислим залізом).
Надмірна кількість діетилового ефіру видаляють за допомогою вакуум-насоса або гумової груші доти, поки не припиниться стікання крапель діетилового ефіру з колонки, і виходить з крана повітря не буде нести лише слабкий запах діетилового ефіру.
Для вилучення кофеїну через колонку 2 пропускають 45-50 см3 хлороформу, який збирають у мірну колбу місткістю 50 см3 з одного міткою, і доводять об'єм до мітки хлороформом. Отриману суміш ретельно перемішують.
Крани колонок регулюють так, щоб швидкість рідини (хлороформу і діетилового ефіру) не перевищувала 3 см3/хв і забезпечувала рівномірне проходження рідини через весь вміст колонок.
Щоб уникнути вдихання парів розчинів діетилового ефіру і хлороформу і можливості вибуху їх додавання повинно проводитися в хорошовентіліруемом витяжній шафі.
спектрометричного виміру
Спектрометричне вимір аналізованого розчину
На спектрофотометрі вимірюють оптичну щільність отриманого розчину в кварцовою кюветі по відношенню до чистого насиченому водою хлороформу при довжині хвилі 276 нм, що відповідає максимуму спектра поглина...
