собливу тривимірну структуру, яка з'єднує сплайс-сайти разом, надаючи можливість атакуючим групам здійснити хімічну реакцію. Завдяки великому подібністю хімізму обох реакцій, припускають, що механізм пре-мРНК сплайсингу (за допомогою сплайсосома) виник з групи механізмів само-сплайсингу. Відповідно з цією ідеєю, сплайсосомние snRNP зайняли хімічні ролі інтронів другої групи. (Alberts B. et al, 2007)
3. Фактори сплайсингу: різноманітність, будову і функції
Існує безліч факторів сплайсингу, досить різноманітних за своїм будовою і функціями. Однак є кілька факторів, які використовуються найчастіше і в більшій кількості.
1. Багатий серином і аргініном фактор сплайсингу 1 (SRSF1), також відомий як фактор альтернативного сплайсингу 1 (ASF1), пре-мРНК-сплайсинг-фактор SF2 (SF2) або ASF1/SF2, являє собою білок, який у людини кодується геном SFRS1. (Kim DJ et al, 2009) Цей ген знаходиться на хромосомі 17. (Krainer AR et al, 1990).
ASF/SF2 необхідний для проходження всіх реакцій сплайсингу і впливає на вибір сплайс-сайту залежно від концентрації. У результаті його роботи може відбуватися альтернативний сплайсинг. (Zuo P., Manley JL, 1993) ASF/SF2 також є посередником пост-сплайсінгових перетворень (експорт до ядра і трансляція мРНК). (Michlewski G. et al, 2008)/SF2 є SR-білком і містить два функціональних модуля. У регіоні, багатому серином і аргініном (RS-домен), відбувається основна частина регулювання. За допомогою двох місць розпізнавання РНК (РРС) ASF/SF2 взаємодіє з РНК та іншими факторами сплайсингу. (Hagopian JC et al, 2008)/SF2 потрібно для розпізнавання та відбору 5 -сплайс-сайту і здатний розрізняти кріптіческіе і достовірні сайти сплайсингу. Подальшу освіту Лариат протягом першого етапу сплайсингу також відбувається у присутності ASF/SF2. (Krainer AR et al, 1990) Він сприяє напрямку U1 до 5 -сайтусплайсінга і утворенню cвязи між 5 - і 3 -сплайс-сайтами. (Li X., Manley JL, 2005)/SF2 також асоціюється з U2. (Masuyama K. et al, 2007) Під час реакції ASF/SF2 сприяє використанню інтронів проксимальних ділянок і ускладнює використання інтронів дистальних ділянок, впливаючи на процес альтернативного сплайсингу.
Різні концентрації ASF/SF2 є механізмом регулювання альтернативного сплайсингу. Його дія призводить до утворення різних кількостей продукції. Регуляція відбувається шляхом прямих або непрямих зв'язувань з Екзонно підсилювачами сплайсингу (ESE). (Zhang X. et al, 2008)
Цей фактор сплайсингу може фосфорильоване по Серін у своєму RS-домені особливої ??SR-протеїнкіназою, SRPK1, яка вибірково фосфорилирует до дванадцяти Серін через спрямований механізм, рухаючись від С-кінця до N-кінця. Мульти-фосфорилирование направляє ASF/SF2 до ядра, впливаючи на кількість білок-білкових взаємодій, пов'язаних зі сплайсингом. (Hagopian JC et al, 2008) Ступінь функціонування цього фактора залежить від його фосфорилювання. Послідовне фосфорилювання і дефосфорілірованіе позначає місця переходів між етапами в процесі сплайсингу. (Cao W. et al, 1997)/SF2 бере участь у регуляції геномної стабільності. Вважається, що РНК-полімераза набирає ASF/SF2 для зростаючих РНК-транскриптів, щоб перешкоджати утворенню мутагенних ДНК. Таким чином, ASF/SF2 захищає клітини від шкідливої ??дії самого процесу транскрипції. (Li X., Manley JL, 2005) Він також бере участь у реалізації клітинних механізмів, що перешкоджають пропуску екзонів і забезпечують точне проходження сплайсингу. (Krainer AR et al, 1990) ./ SF2 може виступати в якості онкопротеінамі. (Hagopian JC et al, 2008) Він контролює сплайсинг різних генів-супресорів пухлинного росту і кіназ, які здатні перетворитися шляхом альтернативного сплайсингу в онкогенні ізоформи. (Karni R. et al, 2007) Таким чином, ASF/SF2 є важливою мішенню для лікування онкозахворювань. (Hagopian JC et al, 2008)/SF2 бере участь у реплікації ВІЛ - 1. Для розвитку цей вірус потребує рівновазі сплайсірованний і несплайсірованних форм його вірусної ДНК. Дія ASF/SF2 в реплікації ВІЛ - 1 є потенційною мішенню для ВІЛ-терапії. (Tange T.?., Kjems J., 2001)
Малюнок 3.1 Будова ASF/SF2
2. Діспеціфічная протеинкиназа CLK1 - фермент, який кодується геном CLK1 у людини. Цей ген кодує член сімейства CDC2 (або Lammer) - діспеціфічних білкових кіназ. У ядрі клітини кодується білок фосфорилирует SR-білки, що у процессингу пре-мРНК і переносить їх в нуклеоплазму. Вибір сайтів сплайсингу під час обробки пре-мРНК може регулюватися концентрацією в тому числі SR-білків. Таким чином, кодується білок може грати непряму роль в управлінні вибором сайтів сплайсингу. (Talmadge CB et al, 1998) CLK1 працює і на серин-треонінових, і на тірозінсодержащем субстраті. Вона фосфорилирует SR-білки сплайсосомного комплексу і бере участь в мережі регуляторни...
