х механізмів, що дозволяють цим білкам контролювати процес сплайсингу. (Moeslein F.M. et al, 1998)
3. Фактор сплайсингу U2AF1 (мала субодиниця U2AF) - білок, який кодується у людини геном U2AF1. Цей ген належить до SR-сімейству. U2-ауксіллярний фактор (U2AF) включає в себе велику і малу субчастіци. Його мала субодиниця потрібно для прикріплення snRNPU2 до точки розгалуження пре-мРНК. Ця частинка відіграє важливу роль в канонічному і енхансер-залежному сплайсинге, діючи на зв'язку між великою субодиницею і білком, прикріпленим до енхансером. Були ідентифіковані різні ееізоформи, що утворюються шляхом альтернативного сплайсингу. (Lalioti M.D. et al, 1997)
. U2AF2 (велика субодиниця U2AF) - білок, який кодується геном U2AF2.
Велика субодиниця містить послідовність-залежний зв'язує РНК регіон з трьома мотивами розпізнавання РНК і RS-доменом, необхідними для сплайсингу. U2AF2 прикріплюється до поліпірімідіновой послідовності інтронів на початку процесу утворення сплайсосома.
Разом велика і мала субодиниці беруть участь в прикріпленні snRNP U2 до точки розгалуження пре-мРНК. (Lalioti M.D. et al, 1997)
Рисунок 3.2 Будова U2AF
5. Серін-треонінових протеинкиназа SRPK1 - кодується геном SRPK1 фермент людини.
Цей ген кодує протеїнкінази, специфічні для SR-сімейства факторів сплайсингу. Білок розташований в ядрі і цитоплазмі. Вважається, що він регулює процес канонічного і альтернативного сплайсингу шляхом зміни внутрішньоклітинного розташування факторів сплайсингу.
Деякі форми онокозаболеваній є VEGF-залежними. SRPK1 шляхом фосфорилювання здатний активувати фактор сплайсингу VEGF. Інгібітори SRPK1 можуть бути впроваджені в якості засобу для лікування раку простати. (Gui J.F. et al, 1994).
4. Цис-елементи сплайсингу: різноманітність і функції
Існують різні способи регуляції альтернативного сплайсингу: РНК-білкові взаємодії, РНК-РНК взаємодії, взаємодія пре-мРНК з Некодуючі РНК (у тому числі, малими ЯДЕРЦЕВОГО РНК) та ін. Незважаючи на різноманітність регуляторних механізмів, РНК-білкові взаємодії вважаються основними способами регуляції сплайсингу. (Danckwardt S. et al, 2002) Існує 4 категорії регуляторів:
1. Енхансери сплайсингу екзонів (exonicsplicingenhancers, ESEs);
2. Сайленсери сплайсингу екзонів (exonic splicing silencers, ESSs);
3. Енхансери сплайсингу інтронів (intronic splicing enhancers, ISEs);
4. Сайленсери сплайсингу інтронів (intronic splicing silencers, ISSs).
енхансером активує розташовані поруч сайти сплайсингу або протидіє сайленсери, які можуть репресувати сайти сплайсингу або енхансери. Включення або пропуск екзона визначається співвідношенням цих факторів. Воно в свою чергу може визначається відношенням концентрацій родинних РНК-зв'язуючих білків-активаторів або репрессоров. Велика частина репрессоров сплайсингу - гетерогенні ядерні рибонуклепротеіну (hnRNPs). (Matlin A.J. et al, 2005)
Є й інші регулятори. Наприклад, SR-білки відіграють важливу роль в розпізнаванні сайту сплайсингу. Коли вони взаємодіють з енхансераміекзонов (ESE), вони допомагають U1 зв'язуватися з 5 - сайтом сплайсингу, а також U2AF і U2 з 3 - сайтом сплайсингу. Такі взаємодії відбуваються завдяки наявності RS-доменів. Ці білки можуть працювати разом з іншими позитивними регуляторами. (Bauer JA et al, 2009) білок SRp38 (також відомий як TASR, NSSR, FUSIP1 і SRrp40) в дефосфорілірованном стані діє як репрессор сплайсингу. Однак, недавні дослідження показали, що в фосфорильованому стані він функціонує в якості активатора, залежного від будови сплайсіруемой послідовності. (Berget S.M. et al, 1977)
Відзначено, що ефективність роботи факторів сплайсингу часто залежить від позиції. Наприклад, чинник, який діє, як активатор, будучи прикріпленим до Інтрони енхансером, може виконувати функцію репрессора в інших умовах. (Lim K.H. et al, 2011)
Вторинна структура пре-мРНК-транскрипту також відіграє роль у регуляції сплайсингу, з'єднуючи його елементи або маскуючи послідовності, функціонуючі як сайти прикріплення для сплайс-факторів. (Reid, DC et al, 2009) Разом ці елементи формують «код сплайсингу», який визначає порядок його проходження в різних умовах. (Wang Z., Burge C.B., 2008)
Присутність певній послідовності РНК може збільшити або зменшити можливості сплайсірованія найближчих сайтів залежно від контексту. Цей контекст визначається присутністю чорт інших послідовностей РНК (цис-активність) або клітинними умовами (транс-активність). Дія цис-активного елементу може мат...
