матозоїдів і підрахунку концентрації. Для цього після проведення оцінки рухливості в той же препарат вноситься 96% розчин етилового спирту, шляхом піднесення змоченою фільтрувального паперу до краю покривного скла камери.
Іноді використовують рідину Рубенкова, яка складається з основного фуксину - 0,1 г, барвника Романовського - 0,02 мл, концентрованої карболової кислоти - 0,2 мл, гліцерину - 0,1 мл, етилового спирту ректифікату - 2 мл, 1% розчину натрію хлориду - 100 мл. Ця рідина крім фіксації забарвлює сперматозоїди, що дає можливість оцінити морфологію сперматозоїдів - сперматограмма.
Камеру готують для мікроскопії, так само, як було описано раніше. Для більш зручного дослідження рекомендується витримати камеру Горяєва у вологому середовищі спеціального пристрою. Це необхідно для осідання клітинних елементів. p> Дослідження проводиться шляхом мікроскопії світловим мікроскопом (або фазово-контрастним) при збільшенні 200х (об'єктив 20х і окуляр 10х). Підрахунок сперматозоїдів відбувається всередині квадратів камери Горяєва. Якщо клітина розташована на кордоні між квадратами, то користуються правилом підрахунку тільки на одній стороні камери (Правої або лівої). Підрахунок проводиться сперматозоїдів, що мають головку і джгутик. Якщо зустрічаються аномальні сперматозоїди, наприклад, без джгутика, то вони в підрахунок не входять.
Техніка підрахунку наступна:
В· якщо в одному великому квадраті камери є більше 40 сперматозоїдів, то підрахунком підлягають сперматозоїди, що знаходяться в п'яти великих квадратах;
В· якщо кількість клітин складає від 10 до 40, то досліджуються десять великих квадратів, і якщо є менш ніж 10 сперматозоїдів, то підраховуються сперматозоїди, що лежать в 25 квадратах.
Принцип підрахунку заснований на тому, що знаючи всі розміри камери, відповідно її обсяг, можна визначити концентрацію клітин, що у даному обсязі.
Отже, спочатку визначається кількість малих квадратів, що розташовані у п'яти великих. Це число дорівнює 80 (16 * 5 = 80). Далі визначається обсяг малого квадрата, який становить 1/4000 кубічних міліметра (V = 0, 05 мм * 0,05 мм * 0,1 мм = 1/4000 кубічних міліметра). Після чого підраховується кількість сперматозоїдів в одному малому квадраті. Це число ділять на число малих квадратів (N/80). Визначається кількість сперматозоїдів в 1 кубічному міліметрі. Це виконується так:
В· в 1 кубічному міліметрі обсягу камери міститься в 4000 разів більше сперматозоїдів, ніж в одному малому квадраті.
Формула підрахунку числа клітин в 1 кубічному міліметрі наступна:
C = N * 4000/80 = N * 50 (сперматозоїдів/кубічний міліметр). Оскільки 1 мл містить 1000 кубічних міліметра, відповідно кількість сперматозоїдів в 1 мл визначається за формулою:
C (1 мл) = (N * 50) * 10 3 (сперматозоїдів/мл). p> Наприкінці враховується ступінь розведення еякулята:
C (загальне) = N * 50000 * ступінь розведення я...
