ні з Великої кількості мононуклеотідів - сотенне и даже тисяч. Крім того, послідовність размещения чотірьох різніх мононуклеотідів у полінуклеотидних Ланцюг різніх Видів ДНК неоднакова. Унікальність кожної ДНК візначається самє послідовністю размещения мононуклеотідів в ее молекулі. Віходячі з цього, Дослідження первинної структури ДНК якісного складу, кількісного вмісту та порядком чергування мононуклеотідніх ланок у полінуклеотидних ланцюг є й достатньо ВАЖЛИВО проблемою, над вірішенням Якої працювать Вчені різніх країн, починаючі з початку XX ст.
Трівалій годину Первін структуру ДНК Вивчай на Основі другорядніх даніх: локалізації пуринових и пірімідіновіх блоків, фізико-хімічних властівостей, розподілу мінорніх основ ТОЩО. Переломним етапом у ціх дослідженнях стало Впровадження та Вдосконалення новіх методів, таких як електрофорез у поліакріламідному Гелі, рентгеноструктурний аналіз, радіоавтографія та відкриття ферментів рестриктаз. Дані ферменти мают точно визначеня Субстратні спеціфічність и могут Здійснювати секвенування полінуклеотидних ланцюгів за місцем локалізації ПЄВНЄВ мононуклеотідів пуринового та пірімідінового ряду з Утворення фрагментів з відомімі кінцевімі послідовностямі мононуклеотідів (перелогових від виду рестріктаз). Утворені фрагменти, Завдяк наявності в них негативного заряду (за рахунок дісоційованіх фосфатних груп), розділяють методом електрофорезу в поліакріламідному Гелі. Даній метод оказался й достатньо чутлівім и Дає змогу розділяті фрагменти ДНК, Які відрізняються за Довжина на одну мононуклеотідну Ланку. p align="justify"> чергування мононуклеотідніх ланок у Утворення коротких фрагментах ДНК візначають помощью методів, в якіх Використовують радіоактівній фосфор (Р 32 ) та секвенацію за участь хімічніх реагентів (діфенілсульфату, гідразину ТОЩО), Які Забезпечують розрівання міжнуклеотідніх зв'язків за місцем локалізації одного з чотірьох нуклеозідмонофосфатів (А, Т, Г, Ц). Потім зразки розділяють методом гель-електрофорезу. За Даними радіоавтограм, електрофореграм візначають Первін структуру коротких фрагментів ДНК. Чергування мононуклеотідів у всій молекулі ДНК візначають по перекріванню послідовностей мононуклеотідів, добути внаслідок Використання рестріктаз, что мают різну Субстратні спеціфічність.
Даній метод Вивчення первинної структури ДНК Було розроблено в Другій половіні 70-х років. ВІН дістав Назву методом секвенування Свердлова-Максама-Гілберта. Дещо раніше (1975 р.) В. Гілберт запропонував метод Вивчення первинної структури ДНК на Основі одержании РНК-вих Копій ПЄВНЄВ ее ділянок за участю ферменту РНК-полімеразі з Наступний Розшифрування їхньої структур. ! Застосування ціх методів дало змогу Розшифрувати Первін структуру ДНК різніх організмів: вірусу SV-40, бактеріофагів y Х-174, а такоже окрем ділянок ДНК-еукаріот ...
