передбачення фенотипу. Відбір потрібного алелі цільового гена здійснюється на основі тісно зчепленого з ним аллеля сусіднього маркерного локусу. Бульшая точність відбору досягається при використанні пари маркерів, розташованих поблизу гена по різні сторони від нього (т. Е. Маркерів, фланкують цільової ген). Якщо ген отсеквенірован та виявлено відмінності нуклеотидної послідовності різних алелей даного гена, то можна розробити так званий «внутрігенних маркер». Використання такого маркера дозволить відбирати потрібні генотипи з найбільш високою точністю.
Метод ОПМ добре зарекомендував себе при беккросной і лінійної селекції, а також при створенні пірамід генів [Moose, Mumm, +2008].
При беккросной селекції можна вести відбір за внутрігенних маркеру (foreground selection), по маркерами, тісно зчепленим з геном (recombinant selection), по генетичному фону (background selection), а також комбінувати відбір по генетичному фону з відбором за внутрігенних маркеру або по маркерами, тісно зчепленим з геном. Використання значно більшого числа маркерів, рівномірно розподілених по геному, дозволяє не тільки контролювати передачу цільового гена від донора реципієнту, а й прискорювати відновлення генома реципієнта.
2. Матеріал і методи дослідження
Робота виконана в лабораторії біотехнології Краснодарського науково-дослідного інституту сільського господарства ім. П.П. Лук'яненко в 2013-2014 роках.
Об'єкт дослідження - м'яка пшениця (Triticum Aestivum). Досліджено 70 інтрогрессівних ліній м'якої пщеніца з колекції КНИИСХ, несучі генетичний матеріал від синтетичних форм Т. miguschovae, авродес і авролата. Повний список цих ліній наведено в таблиці 3 по ходу викладу результатів їх порівняння. Для ідентифікації маркерів використовувалася геномна ДНК. У ПЛР-аналізі розпізнавались маркери 7 відомих генів стійкості до листової іржі: Lr9, Lr21, Lr35, Lr39, Lr47, Lr50, Lr51.
геномної-додана форма Т. miguschovae (ААGGDD), була отримана від схрещування T. militinae з стійкою до листової іржі формою Aegilops tauschii [Жиров Є.Г., 1980]. Цей синтетичний гексаплоїди володіє високою фертильністю, компактним колосом і досить легким вимолотила. Отримана форма відрізняється від видів секції Triticum за двома геномам і по наявності іншої цитоплазми, яка однозначна з цитоплазмою T. timopheevii. Володіє абсолютною стійкістю до листовий, стеблової, жовтої іржі і до борошнистої роси.
геномної-заміщені синтетичні форми Авродес і Авролата були отримані на основі виділення і використання тетракомпонента м'якої пшениці (AABB, 2n=28). Можливість видалення одного з субгеному (генома D) вперше була продемонстрована Кербером [Kerber, 1964]. Такі тетракомпоненти у відсутності генома D втратили хлібопекарські властивості. Однак схрестивши отримані тетракомпоненти з Ae. Tauschii і відібравши амфідиплоїд, Кербер і Дік відновили гексаплоїдному пшениці та її хлібопекарські якості [Kerber, Dick, 1969]. Таким чином, було показано значення D генома з одного боку, а можливість заміщати один з субгеному м'якої пшениці геномами інших видів - з іншого боку.
Грунтуючись на такої можливості, в кінці сімдесятих років минулого сторіччя в лабораторії цитогенетики КНИИСХ під керівництвом Є.Г. Жирова був розроблений оригінальний підхід по перебудови геному м'якої пшениці. Шляхом заміщення генома твердої пшениці на геноми AABB був отриманий тетраплоїдний компонент сорти Аврора. З використанням цього тетракомпонента були створені синтетичні геномної-заміщені форми, у яких геном D м'якої пшениці був заміщений відповідно на геноми Ae. speltoides і Ae. umbellulata (авродес і авролата).
. 1 Польові методи дослідження
Реакцію рослин на поразку листковою іржею визначали в польових умовах. Популяцію ліній заражали у фазі виходу в трубку сумішшю Уредоспори іржі, зібраних з різних сортів пшениці. Визначення стійкості проводили за міжнародною шкалою. Майнс і Джексона [Mains EB, Jackson HS, 1926]. До стійких відносили рослини з типом реакції 0 (імунні), 1 (високостійкі) і 2 (помірно стійкі). До сприйнятливим відносили рослини з типом реакції 3 (помірно сприйнятливі) і 4 (сильно сприйнятливі).
Малюнок 2 - Шкала стійкості Мейнс і Джексона
2.2 Виділення геномної ДНК
геномної ДНК пшениці виділяли за методом Плашке зі співавторами [Plaschke J. et al., 1995] з незначними модифікаціями. Для виділення використовували п'яти-семи денні етіалірованние проростки рослин пшениці. Зразок представляв суміш ДНК, виділеної з 5-10 індивідуальних проростків одного сорту або лінії, узятих в еквімолярних кількості. Методика виділення:
- відбирають 2 ділянки листа ...
